179990. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polopeptidek előállítására
11 179990 12 0,502 g (1,16 millimól) N-benziloxikarbonil-L-triptofil-L-szerin-hidrazid és 5 ml dimetilformamid —20 C°-ra hűtött oldatához keverés közben 0,77 ml 6,02 n dioxános sósavat (4,64 millimól), majd 0,14 ml (1,22 millimól) tercier butilnitritet adunk. Az oldatot 30 perc múlva —30 C°-ra hűtjük és 0,65 ml (4,65 millimól) trietilamin hozzáadásával semlegesítjük. Ezután 0,547 g (0,77 millimól) L-tirozil-azaglicil-L-leucil-L-arginil-L—prolin-etilamid-dihidroklorid, 0,108 ml (0,77 millimól) trietilamin és 5 ml dimetilformamid —20 C°-ra előrehűtött elegyét adjuk hozzá, a keverést 1 órán át —20 C°-on, majd 48 órán keresztül 4 C°-on folytatjuk. A reakcióelegyet szűrjük és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A nyers peptidet szilikagél-oszlopon történő kromatografálással tisztítjuk, eluálószerként kloroformot, 10 tf.% metanolt tartalmazó kloroformot és 11:8:2 tf.-arányú kloroform-metanol-víz elegyet alkalmazunk. Kitermelés: 0,424 g (52,9%). Md —16,84° (c=l,5, metanolban), RfA 0,61, RfC 0,36, RfD 0,67, RfK 0,90. 18. lépés (R—Me) Az 5. lépés szerint járunk el. Kitermelés: 66%. Op.: 102—104 C°. [<x]g -15,5° (c=l, metanolban), RfD 0,76, RfE 0,68, RfF 0,76, RfH 0,74. 19. lépés (R=Me) A 6. lépés szerint járunk el. 20. lépés (R=Me) A 7. lépés szerint járunk el. Kitermelés: 93%. Op.: 145—146 C°. Md +8,7° (c = 1,2, metanolban), RfA0,88, RfB0,88, RfC 0,83, RfD 0,80, RfE 0,59, RfF 0,78, RfH 0,73. 21. lépés 2,41 g (4 millimól) N-benziloxikarbonil-O-benzil-L-tirozil-azalanil-L-leucin-metilészter és 36 ml metanol oldatához keverés közben 12 ml (12 millimól) 1 n nátriumhidroxid-oldatot adunk és a keverést 3 órán át folytatjuk. A metanolt vákuumban eltávolítjuk és a maradék vizes oldatot (40 ml) citromsavval megsavanyítjuk (pH =3) és etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos extra ktumot vízzel mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és az oldószert ledesztilláljuk. A maradék 200 ml 3: 2 tf.-arányú dimetilformamid-víz eleggyel képezett oldatát AG lx—2 gyanta oszlopra (100 ml) visszük fel. Az oszlopot a fenti oldószerrel (50 ml) mossuk, majd a tripeptidet 3: 2 tf.-arányú dimetilformamid-víz elegyben oldott 0,2 mólos ecetsav oldattal eluáljuk. A tripeptidet tartalmazó frakciókat egyesítjük, vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel kezeljük és összegyűjtjük. Kitermelés: 1,22 g (51,7%). Op.: 195 C° (bomlás). Md ~25,4° (c = l, dimetilformamidban). 22. lépés (R=Me) A 10. lépés szerint járunk el. Kitermelés: 43%. 14. és 15. lépés [a]” —25,9° (c=l, metanolban), RfA 0,72, RfB0,76, RfC 0,85. 23. lépés (R=Me) A 11. lépés szerint járunk el. 24. lépés (R=Me) A 15. lépés szerint járunk el azzal a különbséggel, hogy a végterméket a szilikagél-oszlopon történő kromatografálás után Sephadex LH—20-on dimetilformamidban történő gélszűréssel is tisztítjuk. Kitermelés: 63%. [a]!? —24,76° (c=0,8, metanolban), RfA 0,58, RfC 0,42, RfD 0,65, RfK 0,95. 25. lépés 24,9 g (100 millimól) N-benziloxikarbonil-L-prolin, 11,2 g (100 millimól) szemikarbazid-hidroklorid, 14,5 ml (100 millimól) trietilamin és 200 ml dimetilformamid szuszpenziójához keverés és 0 C°-ra való hűtés közben 20,6 g (100 millimól) diciklohexilkarbodiimidet adunk és a keverést 16 órán át 4 C°-on folytatjuk. A diciklohexilkarbamidot szűréssel eltávolítjuk és a szűrletet kis térfogatra bepároljuk. A maradékhoz 200 ml vizet adunk és az oldatot 3X50 ml etilacetátttal extraháljuk. A vizes oldatból kiváló terméket kb. 1 óra múlva szűrjük. Vizes metanolból történő átkristályosítás után 16,5 g (53,9%) dipeptid-amidot kapunk. Op.: 189— 190 C°. [a]□ —43,6° (c=l,4, dimetilformamidban), RfD 0,54, RfF 0,52, RfH 0,38, RfK 0,78. 26. lépés A katalitikus redukciót 5 súly%-os szénre felvitt palládium katalizátor jelenlétében 2 ekvivalens sósavat tartalmazó 80 tf.%-os vizes dimetilformamidban 6 órán át szobahőmérsékleten végezzük el. 27. lépés 8,24 g (31 millimól) N-benziloxikarbonil-L-leucin és 4,55 ml (32,5 millimól) trietilamin 100 ml tetrahidrofuránnal képezett oldatához —10 C° és —15 C° közötti hőmérsékleten 2,83 ml (29,5 millimól) klórhangyasavetilésztert adunk. A reakcióelegyet 3 percen át ezen a hőmérsékleten keverjük, majd keverés közben —10 C°-on 5,79 g (31 millimól) N“-nitro-L-arginin és 15,5 ml (31 millimól) 2 n nátriumhidroxid-oldat 50 ml dimetilformamiddal képezett oldatába öntjük. A reakcióelegyet — 10 C°-on 30 percen át, majd 1 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Az oldószereket vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot 50 ml etilacetát és 50 ml víz között megosztjuk. A vizes fázist elválasztjuk és etilacetáttal még kétszer extraháljuk. Az egyesített szerves fázisokat 1X25 ml vízzel mossuk és elöntjük. Az egyesített vizes rétegeket telített citromsav-oldattal megsavanyítjuk és 3X100 ml etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos extraktumokat egyesítjük, vízzel mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradékot etilacetát és petroléter (fp.: 60—80 C°) elegyéből 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
