179990. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polopeptidek előállítására
9 179990 10 éjjelen át 4 C°-on keverjük, az oldhatatlan szilárd anyagot szűréssel eltávolítjuk és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot etilacetát és víz között ellenáramos módszerrel megosztjuk (4 átvitel). A vizes fázisokat egyesítjük és szárazra pároljuk. A maradékot n-butanol és 5 tf.%-os vizes ecetsav között ellenáramos módszerrel megosztjuk (12 átvitel). Az egyesített n-butanolos fázisok bepárlásával kapott nyers peptidet szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, eluáló oldószerként 5 tf.% metanolt tartalmazó kloroformot és 10 tf.% metanolt tartalmazó kloroformot alkalmazunk. A célvegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, szárazra pároljuk és a maradék vizes oldatát anioncserélő gyantán (AG 1—X2) vezetjük át az NMercier butoxikarbonil-N“-nitro-arginin eltávolítása céljából. Az oszlopot ezután vízzel mossuk, az egyesített vizes fázisokat és mosófolyadékokat fagyasztva szárítjuk. 16,67 g (89%) azapeptid-származékot kapunk. Op.: 109—111 C° (bomlás). [a]” —39,0° (c = l, metanolban), RfA 0,62, RfB 0,74, RfC 0,59, RfD 0,70, RfE 0,20, RfF 0,60, RfH 0,61, RfK 0,85, RfQ 0,13. 4. lépés Az N-tercier butoxikarbonil-származékot etilacetátban oldjuk és 3 n etilacetátos sósavval (4 ekvivalens) 1 órán át szobahőmérsékleten kezeljük. .5. lépés (R=H) 2,90 g (22 millimól) tercier butoxikarbonilhidrazid és 11,71 g (20 millimól) N-benziloxikarbonil-O-benzil-L-tirozin-2,4,5-triklórfenil-észter 40 ml dimetilformamiddal képezett oldatát szobahőmérsékleten egy éjjelen át állni hagyjuk. A reakcióelegyet a szokásos módon dolgozzuk fel. A maradék éter/petroléter (fp.: 60—80 C°) elegyből történő átkristályosítása után fehér por alakjában 3,46 g (67%) védett hidrazidot kapunk. Op.: 126—127 C°. Md —13,2° (c = l, metanolban) RfD 0,82, RfE 0,65, RfF 0,63, RfH 0,70. 6. lépés (R=H) 5,19 g (10 millimól) l-(N-benziloxikarbonil-0-benzil-L-tirozil)-2-tercier butoxikarbonil-hidrazidot 50 ml etilacetátban oldunk és az oldatot szobahőmérsékleten 1 órán át 8 ml 5 n etilacetátos sósavval (40 millimól) kezeljük. Az etilacetátot vákuumban eltávolítjuk és a hidrokloridot éterrel szűrjük és szárítjuk. 7. lépés (R=H) A fenti hidrokloridot 75 ml tetrahidrofuránban felvesszük, majd előbb 1,15 g (8 millimól) trietilamint és utána 1,36 g (8 millimól) N-karbonil-L-leucin-metilésztert adunk hozzá. A reakcióelegyet 16 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd a szokásos módon dolgozzuk fel. A maradékot etilacetát és petroléter (fp. : 60—80 C°) elegyéből átkristályosítjuk. 4,57 g (77,7%) azatripeptidszármazékot kapunk. Op.: 156—157 C°. [a]D —10,3° (c = l, metanolban) RfD 0,81, RfE 0,45, RfP 0,26, RfQ 0,47. 8.lépés 2,95 g (5 millimól) N-benziloxikarbonil-O-benzil-L-tirozil-azaglicil-L-leucin-metilészter és 50 ml metanol oldatához 5 ml (100 millimól) hidrazin-hidrátot adunk, A reakcióelegyet 2 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd a hidrazidot vízzel kicsapjuk és metanol-éter elegyből átkristályosítjuk. Kitermelés: 2,74 g (92,8%). Op.: 169—170 C°. [a]^ —9,05° (c=1, dimetilformamidban) RfA 0,76, RfB 0,75, RfC 0,73, RfD 0,63, RfF 60„ RfH 0,55. 9. és 10. lépés (R=H) I, 18 g (2,0 millimól) N-benziloxikarbonil-O-benzil-L-tirozil-azaglicil-L-leucin-hidrazídot 10 ml dimetilformamidban oldunk, majd az oldatot —20 C°-ra hűtjük és előbb 1,46 ml 5,49 mólos dioxános sósavat (8 millimól) és utána 0,25 ml (2,2 millimól) tercier butil-nitritet adunk hozzá. Az oldatot 5 perc múlva —30 C°-ra hűtjük és 0,836 g (2,2 millimól) N“-nitro-L-arginil-L-prolin-etilamid-hidroklorid, 1,43 ml (10,2 millimól) trietilamin és 10 ml dimetilformamid előrehűtött elegyét adjuk hozzá. A reakcióelegyet 1 órán át —10 C°-on, majd 48 órán keresztül 4 C°-on keverjük. A reakcióelegyet a szokásos módon dolgozzuk fel és a pentapeptid-származékot szilikagél-oszlopon történő kromatografálással tisztítjuk. Eluáló oldószerként kloroformot és 3 tf.% metanolt tartalmazó kloroformot alkalmazunk. Kitermelés: 0,695 g (38,5%). RfA 0,71, RfB 0,72, RfC 0,84. II. lépés (R=H) A katalitikus redukciót 5 súly%-os palládium/szén katalizátor jelenlétében, 2 ekvivalens sósavat tartalmazó 80 tf.%-os vizes ecetsavban végezzük el. 12. lépés 33,84 g (100 millimól) N-benziloxikarbonil-L-triptofán és 11,0 ml (100 millimól) N-metil-morfolin 200 ml tetrahidrofuránnal képezett oldatához —20 C°-ra való hűtés és erős keverés közben 9,0 ml (95 millimól) klórhangyasavetilésztert adunk. 2 perc múlva 17,10 g (110 millimól) L-szerin-metilészter-hidroklorid és 12,1 ml (110 millimól) N-metil-morfolin 150 ml dimetilformamiddal képezett —20 C°-ra előrehűtött oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet —20 C°-on 30 percen át, majd szobahőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. A reakcióelegyet szokásos módon dolgozzuk fel. Olajat kapunk. Etilacetát és petroléter (fp. : 60—80 C°) elegyéből történő kétszeri átkristályosítás után 30,53 g (69,5%) dipeptid-származékot kapunk. Op.: 140,5—141 C°. [oc]d —22,13° (c=l,4, dimetilformamidban). 13. lépés Az előzőek szerint előállított észtert (30,53 g, 69,5 millimól) 1 liter metanolban oldjuk és 15 ml 62 súly tf.%-os hidrazinhidrát-oldatot adunk hozzá. A kiváló hidrazidot 16 óra múlva leszűrjük, metanollal és éterrel mossuk, majd forró etanolból kristályosítjuk. Kitermelés: 23,18 g (75,8%). Op.: 178—179C°. [«]d —25,27° (c=l, dimetilformamid) RfD 0,65, RfE 0,20, RfF 0,43, RfH 0,50. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
