179990. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polopeptidek előállítására
7 179990 8 —30 C°-ra hűtjük és az oldatot 0,8 millimól trietilamin hozzáadásával semlegesítjük. 0,1 millimól L-triptofil-L-szeril-L-tirozil-A-L-leucil-L-arginil-L-prolil-É-F-dihidroklorid (melyet az N-benziloxikarbonil-származékból két ekvivalens sósavat tartalmazó 80 tf.%-os vizes metanolban 5 súly%-os szénre felvitt palládium katalizátor jelenlétében 16 órán át történő hidrogénezéssel állítunk elő) 0,1 millimól trietilamin és ml dimetilformamid —20 C°-ra előrehűtött elegyét adjuk hozzá és a reakcióelegyet 24 órán át 4 C°on keverjük. A dimetilformamidot vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot Sephadex LH 20-on kromatografáljuk, eluálószerként dimetilformamidot alkalmazunk. A kapott polipeptidet Sephadex G—25-ön megoszlásos kromatográfiával tovább tisztítjuk; eluálószerként n-butanol/ecetsav/víz/piridin 5 : 1: 5 : 1 tf.-arányú elegyét alkalmazzuk. L-piroglutamil-L-hisztidil-L-triptofil-L-szeril-L-tirozil-A-B-L-arginil-L-prolil-azaglicin-amid szintézise : (n) általános eljárás (3., 4. és 5. séma) 0,2 millimól L-piroglutamil-L-hisztidil-L-triptofil-L-szerin-hidrazidot 4 ml dimetilformamidban oldunk és az (m) eljárásnál ismertetett módon aziddá alakítjuk. A kapott azidot az (m) eljárás szerint 0,15 millimól' L-tirozil-A-B-L-argínil-L-prolil-azaglicin-amid-hidrokloriddal kapcsoljuk (e vegyületet az N-benziloxikarbonil-0-benzil-L-tirozil-A-L-leucil-(N“-nitro)-L-arginil- 5 -L-prolil-azaglicinamid 80 tf%-os vizes metanolban 5 súly%-os szénre felvitt palládium katalizátor jelenlétében 20 órán át történő hidrogénezésével állítjuk elő). A végterméket a fenti módszerrel hidroklorid formájában tisztítjuk. 10 L-piroglutamil-L-hisztidil-L-triptofil-L-szeril-tirozil-A-B-L-arginil-L-prolil-azaglicin-amid szintézise : (o) általános eljárás (4. és 6. séma) 15 A védett dekapeptid-származékot [mely a 6-helyzetben Ser(Bu‘)-t vagy az 5-helyzetben Tyr(Bu*)-t tartalmaz] 5 ml 90 tf.%-os vizes trifluorecetsavban oldjuk. Az oldathoz három csepp ß-merkaptoetanolt adunk és szobahőmérsékleten 45 percen át állni hagyjuk. Az ol- 20 dószert vákuumban eltávolítjuk és a maradékot egyszer vízből és kétszer tercier butanolból fagyasztva szárítjuk. Kitermelés: 90—100%. A fenti három általános eljárással a következő táblázatban megadott 1—10. példában felsorolt (I) általá- 25 nos képletű vegyületeket állítjuk elő : Táblázat (I) általános képlet Példa száma A B E F Eljárás Kitermelés, % Papír-elektroforézis, Rf (luliberinhoz viszonyítva) Rf A pH 2,1 pH 6,5 í. Azgly Leu _ —nhc2h5 m 25 0,98 1,03 0,28 2. Azala Leu — —nhc2h5 m 42 0,97 1,0 0,30 3. D-Ala Leu Azgly —nh2 m 32 0,97 1,0 0,30 4. D-Phe Leu Azgly —nh2 n 40 1,0 0,71 0,27 5. D-Trp Leu Azgly-nh2 n 15 0,53 0,37 0,37 6. D-Tyr(Me) Leu Azgly-nh2 n 15 0,92 0,87 0,25 7. D-Ser(But) Leu Azgly —nh2 n 31 0,94 0,96 0,25 8. D-Ser Leu Azgly-nh2 o 95 0,94 0,96 0,25 9. D-Phe MeLeu Azgly-nh2 o 46 0,84 0,87 0,35 10. D-Tyr(Me) Meleu Azgly —nh2 n 26 0,87 0,90 0,34 A fenti eljárásoknál felhasznált kiindulási anyagokat az 1. és 2. sémában [(m)-eljárás], a 3., 4. és 5. sémában [(n)-eljárás] és a 4. és 6. sémában [(o)-eljárás] ismertetett elját ásókkal állíthatjuk elő. A reakció-sémákban szereplő rövidítések jelentése a következő: OCp =2,4,5-triklórfenil-észter Bzl =benzil Z =benziloxikarbonil Boc ^tercier butoxikarbonil DMF=dimetilformamid A bekerített számok a szóbanforgó lépést jelentik. 1.lépés 19,94 g (80 millimól) N-benziloxikarbonil-L-prolint és 8,8 ml (80 millimól) N-metil-morfolint 200 ml víz- 60 mentes tetrahidrofuránban oldunk és az oldatot —20 Ccra hűtjük. Az oldathoz 7,15 ml (76 millimól) klórhangyasavetilésztert csepegtetünk, majd 2 perces keverés után —20 C°-on előrehűtött 20 ml 70%-os vizes etilaminoldatot (300 millimól) adunk hozzá és a keverést 18 órán 65 át 4 C°-on folytatjuk. A reakcióelegyet szokásos módon 45 feldolgozzuk és a maradékot etilacetát/petroléter (fp.: 60—80 C°) elegyből kristályosítjuk. Kitermelés: 12,97 g (58,7%). Op.: 107—108 C°. [a]2n,s —43,88° (c = l, metanolban), RfD 0,69, RfE 0,53, RfF 0,67, RfH 0,62, RfP 0,57, RfQ 0,66. 50 2. lépés A katalitikus reakciót 5%-os szénre felvitt palládium katalizátor jelenlétében, 1 ekvivalens sósavat tartalmazó 55 vizes etanolban 5 órán át szobahőmérsékleten végezzük el. 3. lépés 13,5 g (42,3 millimól) NMercier butoxikarbonil-N“-nitro-L-arginin, 7,15 g (47 millimól) L-prolin-etilamid-hidroklorid, 11,5 g (85 millimól) l-hidroxi-benzotriazol és 6,58 ml (47 millimól) trietilamin dimetilformamidos oldatát 0 C°-ra hűtjük és 9,13 g (44,4 millimól) diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. A reakcióelegyet egy 4
