179788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbapeném-származékok előállítására
47 179788 48-észtert a fertőzést követően azonnal szubkután adagoljuk az egerekbe. A vegyület 50%-os hatásos adagja DDY hím egerek esetért (Shizuoka) 4,5 mg/kg. 3. Toxicités A PS—6 antibiotikum-tritil-észtert intraperitoneálisan alkalmazzuk DDY hím egereken (Shizuoka). 500 mg/kg mennyiségben alkalmazva akut toxicitás nem lép fel. 12. példa PS—6 antibiotikum-metil-észter 2,0 mg, 9. példa szerint előállított PS—6 antibiotikum-nátrium-só készítményt 1 ml száraz dimetilformamidban szuszpendálunk, majd hozzáadunk a reakcióelegyhez 20 |xl trietilamínt és 50 ixl metiljodidot. A reakcióelegyet 2 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd az így kapott reakcióelegyből 20 jxl-t feloldunk metanolban. Ezt a mintát Hitachi Recording Spectrophotometer Model EPS—3T (Hitachi Ltd.) berendezésben vizsgáljuk. Mérjük 315 nm-nél az abszorpció növekedését, melyből megállapítható, hogy a reakció mennyire halad előre. A reakció befejeződése után az egész reakcióelegyet beleöntjük 20 ml benzolba, majd ezt követően azonnal kétszer mossuk 10 ml 0,1 M foszfát-puffer-oldattal (pH=7,0). A benzolos oldatot vízmentes nátriumszulfáton dehidratáljuk, majd 35 °C hőmérsékleten csökkentett nyomáson 1 ml mennyiségre pároljuk be. A betöményített oldatot Bio-Beads S—X3 (Bio-Rad Laboratories) oszlopra (1,2x85 cm) visszük és a kromatogramot benzollal kifejlesztjük. A kapott eluátumot vékonyréteg-kromatográfiával fejlesztjük ki [Kieselgel 60 F254Í benzol(aceton=l : 1)]. Az eluátumokat összegyűjtjük és ultraibolya abszorpciós vizsgálattal azonosítjuk a PS—6 antibiotikum-metil-észtert. A frakciókat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és így színtelen olajos terméket kapunk, melyet feloldunk 1 ml acetonban. Az acetonos oldatot Sephadex LH—20 (Pharmacia Fine Chemicals AB) oszlopra (1,2x85 cm) visszük, melyet előzőleg acetonnal kezeltünk és a kromatogramot acetonnal kifejlesztjük. A fenti módszerrel megállapítjuk, hogy mely frakció tartalmaz PS—6 antibiotikum-metil-észtert és ezeket a frakciókat összegyűjtjük. Az összegyűjtött frakciókat szárazra pároljuk és így 1,0 mg fehér olajos anyagot kapunk, mely a PS—6 antibiotikum-metil-észter. (1) Vékonyréteg-kromatográfia Rf=0,45 (Kieselgel 60 F254 lemez; benzol ; aceton=l ; 1) (2) Ultraibolya abszorpciós maximum metanolban 316,6 nm (3) Molekulasúly (Tömegspektrográfia) CI5H22N204S összegképletre számított: 326, 130 000 kapott: 326, 128 683 (4) Proton magmágneses rezonancia A PS—6 antibiotikum-metil-észter proton magmágneses rezonancia spektrumát JEOL NMR spectrometer JNM PS—100 berendezésben (Japan Electron Optics Laboratory Co., Ltd.) vizsgáljuk. A vizsgálathoz 2 mg PS—6 antibiotikum-metil-észtert 0,5 ml deuterokloroformban oldunk. A PS—6 antibiotikum-metil-észter proton magmágneses rezonancia spektrumát a 8. ábra mutatja. A jellemző jelek az alábbiak : (i) triplett*, melynek központja 1,06 ppm-nél van (CH3—CH—) I CHj (ii) éles szingulett 2,0 ppm-nél (CH3—CO—) (iii) multiplett 2,6—3,6 ppm között 10 (—ch2— ,—CH—) (iv) éles szingulett 3,83 ppm-nél (-COC Hj II l 0 ) * Két dublett, melyek átlapolják egymást és így adnak 15 egy triplettet, melynek hat protonja van. A PS—6 antibiotikum szerkezete és a fenti fizikaikémiai tulajdonságok alapján a PS—6 antibiotikum-metil-észter szerkezete a (Ild) képletnek felel meg. A 12. példában leírt eljárást megismételjük metil- 20 jodid helyett ekvivalens mennyiségű etiljodid, i-propiljodid, i-butiljodid, n-pentiljodid és n-hexil-jodid alkalmazásával, és így az alábbi termékeket kapjuk : PS—6 antibiotikum-etil-észter PS—6 antibiotikum-i-propil-észter 25 PS—6 antibiotikum-i-butil-észter PS—6 antibiotikum-n-pentil-észter PS—6 antibiotikum-n-pentil-észter PS—6 antibiotikum-n-hexil-észter A fenti észterek all. példában leírtakkal analóg mö- 30 don történő előállítását vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat, infravörös abszorpciós spektrum, proton magmágneses rezonancia spektrum és tömegspektrográfiai vizsgálat bizonyítja. 35 13. példa PS—7 antibiotikum-metil-észter 40 2,0 mg, 9. példa szerint előállított PS—7 antibiotikum-nátrium-só készítményt 1 ml száraz dimetilformamidban szuszpendálunk, majd hozzáadunk a reakcióelegyhez 20 ixI trietilamínt és 50 [xl metiljodidot. A reakcióelegyet 2 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd 45 az így kapott reakcióelegyből 20 jxl-t feloldunk metanolban. Ezt a mintát Hitachi Recording Spectrophotometer Model EPS—3T (Hitachi Ltd.) berendezésben vizsgáljuk. Mérjük 321,5 nm-nél az abszorpció növekedését, melyből megállapítható, hogy a reakció mennyire halad 50 előre. A reakció befejeződése után az egész reakcióelegyet beleöntjük 20 ml benzolba, majd ezt követően azonnal kétszer mossuk 10 ml 0,1 M foszfát-puffer-oldattal (pH=7,0). A benzolos oldatot vízmentes nátriumszulfáton dehidratáljuk, majd 35 °C hőmérsékleten csök- 55 kentett nyomáson 1 ml mennyiségre pároljuk be. A betöményített oldatot Bio-Beads S—X3 (Bio-Rad Laboratories) oszlopra (1,2x85 cm) visszük és a kromatogramot benzollal kifejlesztjük. A kapott eluátumot vékonyréteg-kromatográfiával fejlesztjük ki [Kieselgel 60 60 F254; benzoI(aceton=2 : 1)]. Az eluátumokat összegyűjtjük és ultraibolya abszorpciós vizsgálattal azonosítjuk a PS—6 antibiotikum-metil-észtert. A frakciókat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és így színtelen olajos terméket kapunk, melyet feloldunk 1 ml aceton- 65 ban. Az acetonos oldatot Sephadex LH—20 (Pharmacia 24
