179778. lajstromszámú szabadalom • Reagens készítmények, eszköz és eljárás ketontestek kimutatására
7 179778 8 náljuk, hogy egy pillanatra belemártjuk a vizsgálandó mintába vagy valamilyen más módon visszük rá a vizsgálandó mintát a vivő-matrixra, amikor is kimutatható színváltozás történik, amennyiben ketontest van jelen a mintában. A teszt-eszköz ugyanígy használható akkor is, ha plazma-, szérum- vagy más testfolyadékok mintáit vizsgáljuk. A találmány szerinti teszt-eszköz kívánt esetben egy meghosszabbított hordozóra is szerelhető. A találmány szerinti teszteszköz érzékeny ketontestekre, különösen vizeletben levő acetecetsavra és az acetoacetátra. Mivel jellemző színreakció megy végbe a kimutatandó ketontestkoncentrációtól függően, félkvantitatív meghatározás is lehetséges az ilyen ketontestek esetén. A találmány szerinti reagenskészítmény és eszköz akkor használható acetecetsav kimutatására vizeletben, ha az legalább 1 milligramm (mg) /deciliter (dl) menynyiségben van jelen. A leírásban a jobb megértés kedvéért jellegzetes megjelöléseket használunk ugyan, de ezek csupán a találmány szerinti előnyös változat példaszerű bemutatására szolgálnak és a találmány körét semmiképpen sem korlátozzák. Kereskedelmi forgalomból szerezhető be szabványos nitroprusszid, így a nitroprusszid-nátrium, amely megfelelő a találmány szerinti használatra. Hasonló módon a találmány szerinti készítményekben alkalmazásra kerülő fémsók és primer aminok is könnyen hozzáférhető kereskedelmi termékek. A szervetlen magnézium- és kalciumsók körülbelül 0,5 mólos és körülbelül 2,0 mólos koncentrációtartományba eső oldatok alakjában használhatók. Abban az esetben, ha primer aminokat, így etiléndiamint, pikolilamint (aminometil-piridin), m-aminofenolt, szemikarbazidot, aminometánszulfonsavat, szulfanilsavat, ciszteinsavat, ciklohexilamint és piridoxamint kombinálunk fémsóval, akkor ezek koncentrációja körülbelül 1,0—1,5 súly% tartományban van. A kombinált anyagokat egyidejűleg vagy egymást követően vihetjük be a nitroprusszidba. Egymás mellett egynél több kalcium- vagy magnéziumsót vagy primer amint is használhatunk. Szabványos pufferekként trisz(hidroximetil)aminometán [TRIS], piperazin-N,N’-bisz(2-etánszulfonsav) [PIPES], N-trisz-(hidroximetil)metiI-2-aminoetánszulfonsav használhatók. A nitroprusszid-oldatot körülbelül 7,0 és 9,2 közti pH-tartományban tartjuk. A találmány szerint lehetővé válik a nitroprusszid stabilizálása általában lúgos pH-tartományban, amely növeli a nitroprusszid reakcióképességét. A vivőanyag-matrix megjelölés olyan szivacsos és nemszivacsos mátrixokra vonatkozik, amelyek oldhatatlanok és megtartják szerkezeti alakjukat, ha víz vagy fiziológiás folyadékok hatásának tesszük ki azokat. Megfelelő használható szivacsos mátrixok a papír, cellulóz, fa, szintetikus gyantaszövedék, üvegszál, szövött és nem-szövött termékek, valamint hasonló anyagok. Nem szivacsos mátrixok a szerves képlékeny műanyagok, így a polisztirol, polipropilén és hasonlók. Abban az esetben, ha szivacsos mátrixot használunk, akkor azt előnyösen megfelelő anyagokra, így kétoldalún tapadó szalagokra, valamely oldhatatlan hordozóra, így szerves képlékeny szalagra rögzítjük a használat megkönnyítése céljából. Más változat esetén a találmány szerinti készítményeket hagyományos vivőanyagot tartalmazó sajtolt vagy öntött tabletta alakú hordozóanyagokba ágyazhatjuk be. A táblázatokban a „0—80 mg/dl megkülönböztetés” kifejezés arra az időre vonatkozik, amely olyan színkialakuláshoz szükséges, amely elegendő a 0 mg/dl, 20 mg/dl, 40 mg/dl és 80 mg/dl keton-koncentrációknak kitett teszt-eszközök vizuális megkülönböztetésére. Egy előnyös módszer a találmány szerinti teszteszközök készítésére abban áll, hogy valamely vivőanyag-matrixot a találmány szerinti készítménnyel impregnálunk, illetve ilyen készítményt abba beviszünk. Az impregnál ásón kívül a találmány szerinti eszközöket más alkalmas módon is készíthetjük, így a készítményt rányomjuk vagy ráporlasztjuk a hordozóra vagy a mátrixra. Az eszközöket úgy használjuk, hogy a folyadékmintát érintkezésbe hozzuk az eszközzel vagy a tesztkészítménnyel és megfigyeljük az eszköz vagy a minta színében keletkező változást. A találmány szerinti reagenskészítmények, ahogy már leírtuk, valamely nitroprusszidot tartalmaznak legalább egy szervetlen magnézium- vagy kalciumsóval, vagy e fémsók valamelyikével és egy primer aminnal kombinációban. A következő példák csupán a találmány bemutatására szolgálnak és nem korlátozó jellegűek. A találmány keretein belül számos változtatás, helyettesítés és változás történhet a komponensekben és a paraméterekben a kívánalmaknak megfelelően. 1. példa Ezzel a kísérlettel az Mg++ ionok nitroprusszidoldatokra kifejtett stabilizáló hatását mutatjuk be. 1 mólos és 2 mólos koncentrációjú oldatok készítéséhez megfelelő mennyiségű (analitikai tisztaságú) MgS04.7H20-t feloldunk 2 mólos trisz-(hidroximetil)aminometán [TRIS] vizes pufferben. Ezután 2,5 g Na2[(NO)Fe(CN)5]-ot adunk 50 ml puffer-oldathoz. Az oldatból egyenlő mennyiségeket veszünk ki és ezek pH-ját 0,1 mólos NaOH-oldattal, amelyet cseppeóként adagolunk, az 1. táblázatban megadott értékre állítjuk. Ezeket az oldatokat használjuk fel impregnálásra. 1. táblázat pH 2 mólos Mg++ 1 mólos Mg++ pH=9,2 Mg 2(9,2) Mg 1(9,2) pH=9,0 Mg 2(9,0) Mg 1(9,0) pH=8,6 Mg 2(8,6) Mg 1(8,6) pH=8,3 Mg 2(8,3) Mg 1(8,3) pH=8,0 Mg 2(8,0) Mg 1(8,0) 2,5 cmx lOcm méretű Whatman—3MM szűrőpapírcsíkokat (Whatman, Inc., Clifton, NJ 07014 Amerikai Egyesült Államok) telítődésig impregnálunk az 1. táblázatban megadott oldatokkal. A csíkokat 52 C°-on szárítjuk és 0,5 cm x 0,5 cm nagyságú darabokra vágjuk és ily módon kialakítjuk a találmány szerinti teszteszközöket. Az így készített eszközöket 0,5 cmx8,0 cm méretű műanyaghordozókra ragasztjuk kétoldalún ragadó szalag segítségével. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
