179677. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-N-(omega-amino-alfa-hidroxi-alkanoil)-kanamicin-származékok előállítására
15 179677 16 2. Rázás közben, 30 perc alatt 50 ml acetonban oldott 17,48 g díciklofiexil-karbodiimidet (DCC) adunk hozzá. A hőmérséklet a hozzáadás alatt mintegy 40 C-ra emelkedik, és közben diciklohexil-karbamid (DCU) válik ki. ' " ■ 3. A szuszpenziót 3—4 óráig rázatjuk, eközben a hőmérséklet 2'3—‘25°-ra áll be. 4. A kar Ham id származékot szűréssel eltávolítjuk; a szürötésztát 30 mi acetonnal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékot félretesszük a soron következő acilezés számára. CJ 6'-N-Cbz-Kana A (szilil)9 acilezése 1. Az A) rész 4. pontjában izolált 6'-N-Cbz-Kana A (szilil)9-et 23—24,-on 100 ml vízmentes acetonban oldjuk. 2. Erőteljes rázás közben lassan, 15 perc alatt hozzáadjuk a B) részben előállított NAE-oldatot. A hőmérséklet fokozatosan körülbelül 40°-ig emelkedik. Az oldatot lehűlni hagyjuk 23°-ra és a keverést nitrogénatmoszférában 18—20 ófáig folytatjuk. 3. 100 ml vizet adunk az oldathoz és a pH-t (6,9—7,2) 6n HCI-oldattal 2,2—2,5-ig csökkentjük. 23D-on 15 percig rázzuk. Megjegyzés: két réteg'alakulhat ki, de ez nem okoz problémát a feldolgozásnál. 4. Az acetont vákuumban 30—35° fürdő-hőmérsékleten eltávolítjuk. A bepárolt anyagot nitrogéngázzal kiöblített megfelelő hidrogénező edénybe visszük át. 10 g 5% Pd/C katalizátort adunk hozzá és 2,8 kg/cm2 nyomáson 2—3 óráig hidrogénezzük. 5. A keveréket „Dicalite” szűrőn átszűrjük és a hidrogénező edényt és a szűrőtésztát még 50 ml vízzel átmossuk. 6. A szűrletet a mosófolyadékkal együtt 40—45°-on, vákuumban térfogatának mintegy 1/3-ára (50 ml) bepároljuk. 7. Ellenőrizzük a pH-t. Ha ez nem éri el a 6,9—7,2 értéket, akkór erre' In NH4ÖH-oldattal beállítjuk. A keveréket CG—50 (NH4+) oszlopra (6 x110 cm) visszük fel. 8. Az oszlopot 1000 ml ionmentesített vízzel mossuk, majd 0,5—0,6n NH4OH-dal eluáljuk; az elúció lefolyását automata polariméterrel követjük. Az elúció rendje a következő: Maradék Kana A «• BB R29 -«-amikacin. Egyik acilezési eljárásunknál sem mutattunk ki BB—Kll-et. A potiacil anyag, azaz a Karfa A 1,3--diAHBA analógja az oszlopról 3n NH4OH-dal való mosással nyerhető ki. 9. Egyesítjük az amikacinfrakciókat és 25—30% szilárd anyag képződéséig bepároljuk. 1 térfogat metanollal hígítjuk és beoltjuk amikacin-kristályokkal. 10. 2 óra alatt 2 térfogat izopropanolt adunk hozzá alapos keverés közben és 23°-on 6—8 óráig kristályosítjuk. 11. A szilárd anyagot leszűrjük, 50 ml víz : metanol : IPA 1:1:2 eleggyel, végül 25 ml IPA-val mossuk. 12. Vákuumban 40°-on 12—16 óráig szárítjuk. A kitermelés: 17,3—19,0 g (38—42%) amikacin, melynek tulajdonságai a következők: Vékonyréteg-kromatográfia (TLC) Kloroform : metanol : ammónium-hidroxid : víz (1:4:2: 1) oldószer, 5x20 cm szilikagél-lemezek (Quantum Industries). Ninhidriddel egyetlen zóna mutatható ki (Rf~0,4). Fajlagos forgatóképesség 233 H20 0,1MNH4OH 0,1MH2SO4 «589 —101,6 +101,9 +103,5 C= 1,0%. 13. E rendszerben a BB—K29 kinyerése szintén 39—42%, a maradék kanamicin A 10—14% és az 1,3-diAHBA-Kana A kitermelése körülbelül 5% (az anyagmérleg 95%). 6. példa Amikacin előállítása poli(trimetil-szilil)-Kana A szelektív N-acilezésével vízmentes acetonban I. Összefoglalás Kana A „bázist” acetonitrilben hexametil-diszilazánnal (HMDS) szililezve po!i(trimetil-sziIil)-Kana A képződik. A szililezés foka még bizonytalan, de jelenleg úgy véljük, hogy Kana A (szi!il)10-et kapunk. A poliszililezett Kana A könnyen oldódik a legtöbb szerves oldószerben. 23°-on vízmentes SAE-val acilezve (a SAE és a Kana A mólaránya 1 : 1) keveréket kapunk, amely az amikacin és a BB—K29 Cbz-származékait (általában 2—3 : 1 arányban), továbbá BB—K6-ot (körülbelül 5—8%), nem reagált Kana A-t (15—20%) és némi poliacii-anyagot (körülbelül 5—10%) tartalmaz. Amint az előző munkánkban poli(trimetil-sziliI)-6'-N-karbobenzoxi-Kana A acilezésekor tapasztalható volt, most sem tudtunk egyik kísérletünkben sem BB—Kll-et kimutatni. Az acetonos, acilezetf anyag redukciója és szűrése után végzett kromatográfia CG—50 (NH4+) oszlopon 0,5n NH4OH-e!uenssel 34—39% izolált kristályos amikacint eredményez. II. Egyenletek: lásd a 2. reakcióvázlatot III. Anyagok súly, g térfogat, ml mólok Kana A „bázis” 50 0,103 HMDS (fajsúly 0,774) 86,68 112 0,537 Acetonitril 600 SAE 35,03 0,10 Aceton 850 CG—50 (NH4+) 3000 Metanol szükség szerint IPA szükség szerint IV. Biztonság Kana A „bázis” Ismert hatóanyag. Ajánlatos a szokásos óvatosság. Kana A (szilil),0 Nem áll rendelkezésre közvetlen információ, gondosan kell kezelni. Egyéb anyagok Lásd az 5. példát. 5 10 15 20 25 20 25 40 45 50 55 60 65 8
