179677. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-N-(omega-amino-alfa-hidroxi-alkanoil)-kanamicin-származékok előállítására
17 179677 18 1.50 g Kana A „bázist'’ (KF 2,5—3,5%) 500 ml acetonitrilben (KF<0,01%) szuszpendálunk. Száraz nitrogénáram átvezetése közben a szuszpenziót visszafolyatásig (74°) melegítjük. 2. Lassan, 30 perc alatt 112 ml hexametil-diszilazánt (HMDS) adunk hozzá. Teljes oldódás következik be 4—5 óra alatt, miközben ammóniagáz fejlődik. 3. A visszafolyatást nitrogénatmoszférában 22—26 óráig folytatjuk. 4. A halványsárga áttetsző oldatot vákuumban (40°) bepárolva szirupszerű anyag marad vissza. Felvesszük 100 ml acetonitrilben, majd nagyvákuumban 3—6 óráig szárítjuk. 109—115 g fehéres amorf szilárd anyagot kapunk [90—95%, Kana A (sziiil),0-ként számítva], B) L-(—j-y-karbobenzii-oxi-amino-a-hidroxi-vajsav N-hidroxi-szukcinimid-észterének (SAE) előállítása 1. 100 g L-(—)-y-benzi!-oxi-karbonil-amino-x-hidroxi-vajsavat (BHBA) és 45,38 g N-hidroxi-szukcinimidet (N—HŐS) keverés közben, 23°-on feloldunk 1300 ml etil-acetátban (KF < 0,05%). 2. 81,29 g diciklohexil-karbodiimidet (DCC) 23D-on 400 ml etil-acetátban (KF <0,05%) oldunk. Az oldatot erős keverés közben, 30 perc aiatt hozzáadjuk a fenti 1. műveletben előállított oldathoz. A hőmérséklet 40—42°-ig emelkedik, dicíklohexil-karbamid (DCU) kiválása közben. A szuszpenziót 3—4 óráig keverjük és 233-ra hagyjuk lehűlni. 3. A DCU-t leszűrjük; a szűrőtésztát 250 ml etil-acetáttal (KF<0,05%) mossuk. A DCU-szűrőtésztát eldobjuk, a szűrletet és a mosófolyadékot megőrizzük. 4. A szűrletet és mosóoldatokat 500 ml-re bepároljuk (vákuumban 30—35°-on). Kevés termék kristályosodik ki. 5. A fenti anyagot alkalmas edénybe visszük át és élénk keverés közben 100 ml heptánt adunk hozzá. Szükség esetén beoltjuk SAE-kristályokkal. A kristályosodás azonnal megindul. A keveréket 30 percig 233-on keverjük. 6. 30 perc alatt 400 ml heptánt adunk hozzá és a keveréket 4—5 óráig 23°-on keverjük. 7. Leszűrjük és a szűrőtésztát 200 ml heptán/etil-acetát 3 : 1 eleggyel, majd 100 ml heptánnal mossuk. 8. Vákuumkályhában 30—35°-on 18—20 óráig szárítva 110,1—131,4 g terméket kapunk (80—95%). Olvadáspont: 119—120°, lágyuláspont 114°. TLC : aceton/benzol/ecetsav (4: 12: 1). Kimutatás 1% vizes kálium-permanganát-oldattal. Rf: SAE—0,7; BHBA—0,2 (2 x lOcm-eselőregyártott szilikagél-lapok, Analtech Inc.). C) Kana A (szili!),0 acilezése 1. Az A) rész 4. műveletében izolált Kana A (szilil)10- et 23°-on 500 ml vízmentes acetonban oldjuk. 2. Erős keverés közben, 5—10 perc alatt hozzáadjuk a B) részben előállított SAE-et (35,03 g) vízmentes acetonnal készült 10%-os oldat formájában. A hőmérséklet körülbelül 5°-kaI emelkedik. Az oldatot 23°-ra hagyjuk lehűlni és a keverést 18—20 óráig folytatjuk. V. Eljárás 3. A világos narancsszínű, tiszta oldatot 400 ml vízzel hígítjuk és a pH-l (7,0—7,5) lecsökkentjük 2,2—2,5-re (3n HC1). Az áttetsző oldatot 23°-on 15—30 percig rá za tjük. 4. Az acetont vákuumban, 30—35° fürdőhőmérsékleten lepároljuk (e műveletnél kevés anyag válhat el, de ez nem okoz problémát). A maradékot alkalmas hidrogénező palackba visszük át. Hozzáadunk 10 g 5% Pd/C katalizátort és 3,5 kg/cm2 nyomáson 2—3 óráig hidrogénezzük. 5. A keveréket „Dicalite” szűrőn átszűrjük és a hidrogénezéshez használt edényt és a szűrőtésztát 2 x 50 ml vízzel átmossuk. 6. A szűrletet és a mosófolyadékokat vákuumban 40—45°-on körülbelül 1/3 térfogatra (150—165 ml) bepároljuk. 7. A pH-érték ekkor 6,0—7,0. A keveréket CG—50 (NH4+) oszlopra visszük fel (6x110 cm-es oszlop). 8. Az oszlopot 1000 ml ionmentes vízzel mossuk. 0,5n NH4OH-dal eluáljuk, az elúció követésére automata polarimétert használunk. Az eluált anyagok sorrendje a következő: Maradék Kana A—BB—K6-»BB—K29-►amikacin. Egyik kísérletünkben sem találtunk BB—Kll-et. 9. Egyesítjük az amikacinfrakciókat és 25—30% szilárd anyag képződéséig bepároljuk. 1 térfogat metanollal hígítjuk és beoltjuk amikacin-krisíályokkal. 10. Lassan, 2 óra alatt, erős keverés közben 2 térfogat IPA-t adunk hozzá és 23'-on 6—8 óráig kristályosítjuk. 11. A szilárd anyagot leszűrjük, 35 ml víz/metanol/IPA (1:1:2) eleggyel, majd 35 ml IPA-val mossuk. 12. Vákuumkályhában 40’-on 16—24 óráig szárítjuk. A kitermelés 19,91—22,84 g (34—39%). Az infravörös és mágneses magrezonancia-spektrumok adatai, valamint a fajlagos forgatóképesség teljesen megfelelnek a feltételezett szerkezetnek. TLC-rendszer Kloroförm/metanol/ammónium-hidroxid/víz (1:4:2: 1) elegy, 5 x20 cm szilikagél-lemezek (Quantum Industries). Ninhidrinnel egyetlen zónában a 0,4 Rf-értékű amikacin mutatható ki. 7. példa Amikacin előállítása poli(trimetil-szilil)-6'-N-karbobenzil-oxi-kanamicin A acilezésével tetrahidrofuránban, piválsav és BHBA vegyes anhidridje segítségével A) Vegyes anhidrid előállítása BHBA-t (5,066 g, 20,0 millimól), BSA-t (4,068 g, 20,0 millimól) és trietil-amint (2,116 g, 22,0 millimól) 200 ml, molekulaszitával szárított tetrahidrofuránban oldunk. Az oldatot 2 1/4 óráig visszafolyatás közben forraljuk, majd lehűtjük 10°-ra. Pivaloil-kloridot (2,412 g, 20 millimól) adunk hozzá keverés közben, 2—3 perc alatt, és a keverést — 10°-on 24 óráig folytatjuk. Ezután a hőmérsékletet 23°-ig hagyjuk emelkedni. B) Poli(trimetil-sziIil)-6'-N-Cbz-Kana A acilezése 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
