179677. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-N-(omega-amino-alfa-hidroxi-alkanoil)-kanamicin-származékok előállítására
31 179677 32 eleggyel, 20 ml-es frakciókat szedve, és az egyes frakciókat Merck 60 F—254 lemezeken végzett vékonyrétegkromatografiával követve. Futtatórendszerként kloroform—etano!—28%-os ammónium-hidroxid (1:2:1) elegyet használunk. A kívánt termék egy részét, mely a terméket magas koncentrációban tartalmazó frakciókból kikristályosodik, leszűrjük és analitikai mintának használjuk. A szűrleteket és a többi, kívánt terméket tartalmazó frakciókat (Rf 0,42) egyesítjük, és az oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot dietil-éterrel triturálva összesen 9,7 g (86%) cím szerinti terméket kapunk. Op.: >300°. IR-spektrum (KBr): vc=0 1690 cm“1, NMR-spektrum (DMSO—d6+DCl, pD ~3): S 4,76— 5.26 (6H, m, H,', H," és CO—OCH2—C6H5 x 2), 7.26 (1 OH, s, CO—OCH2—C6H5x2). Analízis a C34H48N40]s.H20 képlet alapján: számított: C: 52,98; H: 6,54; N: 7,27; mért: C: 53,20; H: 6,42; N:7,04. B) Poli(trimetilsziliI)-3,6'-di-N-karbobenzi!oxi-kanamicin A 1,5 g (2 mmól) 3,6'-di-N-karbobenziloxi-kanamicin A (fenti lépés szerint előállítva) és 1,29 g (8 mmól) hexametil-diszilazán elegyét 15 ml acetonitrilben 16 órán át visszafolyatás közben forraljuk. Az átlátszó oldatot vákuumban szárazra pároljuk, és a maradékot 20 ml vízmentes dietilketonban oldjuk. Az oldatot közvetlenül felhasználjuk a következő lépésben. C) Poli(trimetilszilil)-3,6'-di-N-karbobenziloxi-kanamicin A acilezése egyenértéknyi mennyiségű acilezőszer alkalmazásával A B) lépésben kapott oldathoz keverés közben 700 mg L-( )-7.-karbobenziloxi-amino-a-hidroxi-vajsav-N-hidroxi-szukcinimid-észtert adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten 18 órán át keverjük, majd 8 ml vízzel és 35 ml tetrahidro-furánnal kezeljük, a pH-t vizes sósav-oldattal 3-ra állítjuk, 30 percen át keverjük, majd vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 30 ml víz, 40 ml metanol, 10 ml n-butanol és 40 ml tetrahidro-furán elegyében oldjuk, és egy éjszakán át 500 mg palládium-szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort ezután kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, majd liofilizálva 1,7 g nyers BB—K8-at kapunk. Az amorf port vízben oldjuk, az oldat pH-ját vizes sósav-oldattal 4-re állítjuk, és NH/ -ciklusú Amberlite CG—50 oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot szakaszosan vízzel, 0,ln ammónium-hidroxidoldattal, 0,3n ammónium-hidroxid-oldattal, 0,5n ammónium-hidroxid-oldattal és 2n ammónium-hidroxidoldattal eluáljuk, 10 ml-es frakciókat szedünk, és a kromatográfiai vékonyréteg-kromatográfiával [Merck 60 F—254 lemezek, kloroform—metanol—28%-os ammónium-hidroxid-oldat—víz (1 : 4 : 2 : 1) rendszerben] végezzük. A homogén frakciókat egyesítjük, bepároljuk, majd liofilizáljuk. A BB—K8-at tartalmazó frakciókat és a visszanyert kanamicin A frakciókat tartalmazó oldatokat K. Pneumoniae A 20 680 és B. subtilis PCI 129 mikroorganizmusokkal szemben vizsgáltuk. A kromatográfia eloszlását az alábbi táblázat szemlélteti: Frakció száma NH4OH (N) Súly Kitermelés Termék Rrérték 32—39. 0,1 0,3 102 mg részlegesen deblokkolt termék 40—46. 0,3 174 mga 7C kanamicin A 0,42 47—59. 0,3 0,5 106 mg nem azonosított termék 0,33 60—78. 0,5 816 mgb 6T BB—K8 0,18 00 VD VO yi 2 70 mg 5 diacil-kanamicin A 0,05 a) 408 mcg/mg, b) 956 mcg/mg, c) biológiai mérés alapján. A részlegesen deblokkolt terméket palládium-szén katalizátorral hidrogénezve, majd CG—50 oszlopon történő elválasztással további 30 mg (2%) BB—K8-at kapunk. Az összkitermelés ily módon 846 mg (69%). D) PoIi(trimetiIszilil)-3,6'-di-N-karbobenziloxi-kanamicin A acilezése 1,2 egyenértéknyi mennyiségű acilezőszer alkalmazásával A fenti C) lépést ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy 20%-nyi feleslegű acilezőszert alkalmazunk. Ily módon az alábbi eredményeket kapjuk: Frakció száma NH4OH (N) Súly Kitermelés Termek Rférték 28—29. 0,2 107 mg részlegesen deblokkolt termék 30—41. 0,2 157 mg nem azonosított termék 0,35 42—52. 0,3 120 mg nem azonosított termék 0,30 53—81. 0,3 0,5 750 mga 60b BB—K8 0,14 94—116. 1, 2 147 mg 11 diacil-kanamicin A 0,05 a) 933 mcg/mg, b) biológiai mérés alapján. A részlegesen deblokkolt terméket palládium-szén katalizátorral hidrogénezve, majd CG—50 oszlopon történő elválasztással további 21 mg (2%) BB—K8-at kapunk. Az összkitermelés ily módon 771 mg (62%). EJ Poli(trimetiIsziliI)-3,6'-di-N-karbobenziloxi-kanamicin A acilezése 1,5 egyenértéknyi acilezőszer alkalmazásával 5 10 15 ;o 25 70 .75-10 •15 50 55 60 65 16
