179561. lajstromszámú szabadalom • Eljárás neoviridogrisein-antibiotikumok előállítására

11

179561

treonin leucin

hidroxi-prolin alfa-amino-n-vajsav

S7arkn7iri fenil-szarkozin beta,N-dimetil-leucin treonin leucin

hidroxi-prolin alanin szarkozin fenil-szarkozin beta,N-dimetil-leucin

3-Hidroxi-pikolinsavat tömegspektrometriával és rétegkromatográfiával mutatunk ki a következőképpen:

A viridogrisein és a neoviridogrisein I, II, III és IV egy standard mintáját éjszakán át 6n sósavoldatbar 70 110 °C-on hidrolizálva a fent leírt hidrolizátumokhoz jutunk. Mindegyik hidrolizátum csak egyetlen UV-tartományban abszorbeáló foltot mutat azonos Rf-értékekkel, a fent leírt körülmények között.

1. Szilikagél TLC

TLC-lemez: Silicagel 60F-254 (Silicagel Fertigplat ten, E. Merck, Darmstadt)

oldószer: kloroform/metanol = 2:1

Rf: 0,46

2. Cellulóz TLC

TLC-lemez: Eastman Chromagram 13254 cellulóz lemez fluoreszcens indikátorral, (Eastman Kodak Co.)

oldószer: n-butanol/aceton/víz = 4:1:1

Rf = 0,62

A fenti antibiotikumok molekulasúlyát tömegspektrométerbe való közvetlen behelyezés útján határozzuk meg:

Neoviridogrisein I: 876

II: 862

III: 892

Viridogrisein: 878

A neoviridogrisein I, II és III kémiai szerkezetének vizsgálata céljából e három új antibiotikumot és a viridogriseint éjszakán át 0,ln nátrium-hidroxid-oldatban szobahőmérsékleten hidrolizáljuk, majd diazo-me- 10 tánnal metilezzük. Tömegspektrometria előtt Compernolle és munkatársai (Organic Mass Spectrometry,

6. kötet, 151-166. oldal, 1972) módszerével. A kapott fent leírt információkból a neoviridogrisein I, II és III szerkezetét a mellékelt szerkezeti képletek mutátják be. Ezekből látható, hogy a találmány szerinti új antibiotikumok viridogrisein-homológ új depszipeptid antibiotikumok viridogrisein-homológ új depszipeptid antibiotikumok új csoportját képezik. A neoviridogrisein IV-nek a viridogriseinnel és etamycinnel való azonosságát tömegspektrometriával, rétegkromatográfiával, ultraibolya és infravörös spektrometriával és aminosav-analízissel igazoltuk, standard viridogrisein és etamycin mintákat használva.

A laboratóriumi próbákban a neoviridogrisein I, II és III széles mikroba-ellenes hatásspektrummal rendelkezik baktériumok, mycoplasmák, actinomycesek és rickettsiák ellen. Pontosabban jelentős in vitro aktivitást mutatnak a Staphylococcus aureus szokványos és rezisztens törzseivel, valamint Streptococcus pyo- 30 genes, Diplococcus penumoniae, Sarcina lutea, Bacillus subtilis, Nycoplasma gallisepticum, Mycoplasma pulmonis, Mycoplasma fermentans és Mycoplasma agalactiae törzsekkel szemben. A találmány szerinti új depszipeptid antibiotikumok legkisebb gátló kon- 35 centrációit (MIC) különböző mikroorganizmusokra külön-külön és viridogriseinnel és griseoviridinnel együtt is meghatároztuk az ismert sorozat-hígítás segítségével. Az eredményeket a következő táblázatok

mutatják:

40

Neoviridogrisein III:

Viridogrisein:

1. táblázat

Neoviridogrisein I, II és III legkisebb gátló koncentrációi (MIC) (meg per ml)

Mikroorganizmus (a)

Táptalaj

NV*I

NV^II

NV^III

VG++

NV* mix.

NV+— GV+++ mix.

Staphylococcus aureus 209P

BHI =

0,2

0,1

0,2

0,2

0,2

0,1

(EM)r

BHI =

0,4

0,4

0,4

0,4

0,4

0,2

(STH)r

BHI =

0,8

0,8

1,6

1,6

1,6

0,8

(PC, TC, EM, LM)rl

BHI =

6,25

6,25

6,25

6,25

6,25

3,2

(PC,TC,EM,LM)r2

BHI =

6,25

6,25

6,25

6,25

6,25

3,2

(TC,EM,LM,CP)r

BHI —

6,25

6,25

6,25

6,25

6,25

3,2

(SM,STH)r

BHI =

0,4

0,2

0,2

0,4

0,4

0,2

(PC,KM,NM)r

BHI-0,8

0,4

0,4

0,8

0,8

0,4

(EM,CM,SM,PC,TC)r

BHI =

0,4

0,2

0,4

0,4

0,4

0,2

(EM,OM)r

Staphylococcus aureus

BHI =

0,8

0,4

0,8

0,8

0,8

0,4

(TC,CP,PC)r

BHI =

0,2

0,2

0,4

0,4

0,4

0,2

(BX-1633) (PC/

BHI =

0,4

0,2

0,4

0,4

0,4

0,2

(Russell) (PC)r

BHI =

0,2

0,2

0,4

0,4

0,4

0,2

Smith

BHI=

0,2

0,2

0,2

0,4

0,4

0,2

6