179464. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-40 104 jelű antibiotikum előállítására
13 179464 14 néma hyodysenteriae szuszpenzió 0,1 ml-ével oltottuk. A lemezeket anaerob körülmények között inkubáltuk 4 napon át, majd meghatároztuk a hemolitikus treponema növekedését vagy a növekedés hiányát. A vizsgálat szerint az A—40 104 A komponens és a 19,20-dihidro-A-40 104 A 50, 5,0 és 0,5 jug/ml agar koncentrációban gátolja a Treponema hyodysenteriae növekedését. A sertés dizentéria kezelésekor az A-40 104 antibiotikumokat orálisan adjuk a fertőzött sertéseknek, tabletta, kapszula, por alakú készítmény vagy hasonlók alakjában. Előállíthatunk semleges összetevőt és aktív összetevőként A-40 104 antibiotikumot tartalmazó állatorvosi készítményt. Az adagolást előnyösen úgy végezzük, hogy az A—40 104 antibiotikumot a sertés takarmányában adagoljuk. A találmány szerinti A—40 104 antibiotikumok további állatorvosi szempontból felhasználható tulajdonsága, hogy aktívak a Pasteurella fajokkal szemben. A Pasteurella multicoda például a szarvasmarhák, a baromfiak és a sertések légúti fertőzéseinek okozója. A Pasteurella hemolytica elsősorban felelős a szarvasmarhák légúti fertőzéseiért. Az A-40 104 A és ennek dihidro-származékának aktivitását Pasteurella mikroorganizmusokkal szemben in vitro méréssel határoztuk meg. Az eredményeket a 10. táblázatban adjuk meg. 10. táblázat mikroorganizmusok vagy a Spiroplasma fajok gátlására. A találmány szerinti eljárást a következőkben példákkal részletesen szemléltetjük. 1. példa A. Az A-40 104 előállítása rázott tenyészetben 10 A Clitopilus pseudo-pinsitus NRRL 11 179 törzs érett agar tenyészetéről steril tű segítségével steril körülmények között az alábbi összetételű ferdeagart oltjuk: 20 25 szacharóz 25 g melasz 36 g kukoricalekvár 6g maláta ki vonat 10 g dikálium-hidrogén-foszfát enzimesen hidrolizált 2g kazein3 10 g mosott agar 25 g ionmentes víz 1 literre feltöltve 8N—Z kazein, Humko Sheffield, Norwich, New York A beoltott ferdeagart 30 °C hőmérsékleten 14 napon át inkubáljuk. Az érett agartenyészet körülbelül 5 cm2-es felszínéről steril tű segítségével lekaparjuk a 30 micéliumot, és 50 ml, az alábbiakban megadott összetételű vegetatív táptalajt oltunk vele: Vizsgált A-40 104 Dihidro-mikroorganizmus A komponens-A-40 104 A Pasteurella multicoda (borjú) 6,25 6,25 Pasteurella multicoda (pulyka) 12,5 12,5 Pasteurella hemolytica 25,0 16,5 Érzékeny patogén mikroorganizmusokkal fertőzött ember kezelésére használható gyógyszerészeti 45 készítmény előállítására semleges összetevőt és A—40 104 antibiotikumot, mint aktív összetevőt keverünk. A találmány szerinti A-40 104 antibiotikumok másik fontos tulajdonsága, hogy aktívak Spiroplasma 50 fajokkal szemben. A spiroplasma citri a citrusfajok megbetegedését, más Spiroplasma fajok, például a kukorica satnya növekedését okozzák. Az A—40 104 A komponens és ennek dihidro-származéka in vitro vizsgálatok szerint 0,01 rész/millió rész koncentrációban 55 gátolja a Spiroplasma citri növekedését. Az A—40 104 antibiotikumok aktívak növényi patogénekkel szemben. Az A—40 104 A komponens levelekre permetezve vagy a talajba juttatva gátolja a lisztharmatot. Az A-40 104 A komponens 100 60 rész/millió rész mennyiségben a szántóföldbe juttatva gátolja a bab és az árpa lisztharmat okozta megbetegedését, ami a vegyület szisztémás aktivitására utal. Ezen antibiotikumok szisztémás aktivitását különösen előnyösen használhatjuk fel a növényi patogén 65 glükóz tápióka dextrin3 szója-hidrolizátum (por alakú)b ipari élesztőfrakcióc csapvíz 10 g 10 g 10 g 5 g 1 literre feltöltve. A táptalaj pH-ja 5,3, amit 5N nátriumhidroxiddal 6,9-re állítunk be. aStabex 11, A.E. Staley, Decatur, 111. USA. bHySoy T, Humko Sheffield, Norwich, New York. cAmber BYF 300, Amber Laboratories, Juneau, Wise., USA. A beoltott vegetatív táptalajt 250 ml térfogatú Erlenmeyer-lombikokban 25 °C hőmérsékleten 96 órán át percenként körülbelül 5 cm kitéréssel 250-et forduló rázóasztalon inkubáljuk. Ezzel a vegetatív tenyészettel közvetlenül oltjuk a második vegetatív táptalajt. Előnyösen azonban későbbi használatra tároljuk a tenyészetet folyékony nitrogén feletti gázfázisban. Ilyen tárolásra a tenyészetet az alábbiak szerint kistérfogatú ampullákba osztjuk szét. Mindegyik ampullába 4 ml kinőtt vegetatív tenyészetet és 2 ml glicerin-laktóz oldatot teszünk. A glicerin-laktóz oldat összetétele a következő: glicerin laktóz ionmentes víz 300 g 150 g 1 literre feltöltve. Az így előállított szuszpenziókat folyékony nitrogén gázfázisában tartjuk. 7
