179464. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A-40 104 jelű antibiotikum előállítására
5 179464 6 261 n/e-nél (C!7H2s02) jelentkezik a B komponens spektrumában. Az A—40 105 B komponens három olyan hidroxilcsoporttal rendelkezik, amely acilezhető. így például az A—40 104 B komponens piridinnel és ecetsavanhidriddel reagáltatva triacetil-származékot képez, amikor olyan vegyület keletkezik, amelynek tapasztalati képlete C28H40O9, molekulasúlya pedig 520. Ez azt jelzi, hogy az A—40 104 B komponensben a további oxigénatom hidroxilcsoportban helyezkedik el. Az A-40 104 B komponens káliumbromidban vizsgált infravörös abszorpciós spektrumában a következő frekvenciákon (cm-1 ) jelentkezik jelentős elnyelési maximum: 3430 (széles), 2940, 2880, 1735, 1660, 1452, 1385, 1375, 1305, 1280, 1233, 1152, 1094,1020,997,967,933,912,888,752,és 660. A fizikai és kémiai jellemzők alapján a A-40 104 B komponens a IV képletben megadott valószínű szerkezettel rendelkezik. Az A—40 104 A és B komponensekben szerepel egy vinilcsoport, amely ismert módszerekkel redukálható, és amikor 19,20-dihidro-származékokat kapunk. Az A—40 104 A és B komponensek 19,20-dihidro-származékai szintén aktív baktériumellenes vegyületek és a találmány oltalmi köréhez tartoznak. Az A-40 104 A és B komponensek, továbbá ezek 19,20-dihidro-származékai egyaránt tartalmaznak olyan hidroxilcsoportokat, amelyeket ismert módszerekkel acilezhetünk. Az A komponensben négy hidroxilcsoport, a B komponensben három hidroxilcsoport van. Az előállított acilezett származékok érthetően minden helyzetben azonos acilcsoportot tartalmaznak, azaz négyet az A és hármat a B komponensben. Az acilezett származékok szintén baktériumellenes vegyületek. Az A-40 104 A és B komponensek per-(2— 6 szénatomos)-alkanoil-származékai, továbbá az A—40 104 A és B komponensek 19,20- -dihidro-származékai az ismertetett vegyületek közül a legelőnyösebbek. Az A-40 104 antibiotikum-komplex négy komponense kromatográfiás módszerrel’ elkülöníthető és azonosítható. A komponenseket például vékonyrétegkromatográfiával különítjük el, a kromatográfiát szilikagéllel (Merck, Darmstadt) végezzük, old ősze relegyként kloroform és metanol 9 : 1 arányú elegyét használjuk. Biológiai indikátorként Micrococcus luteus-t használunk. Abban az oldószer-elegyben az A—40 104 antibiotikum komplex A—D komponensei az 1. táblázatban megadott Rf-értékeket mutatják. 1. táblázat A-40 104 komponens Rf-érték A 0,21 B 0,36 C 0,52 D 0,67 Elkülöníthetjük a komponenseket papírkromatográfiával is, ebben az esetben Whatman No. 1. kezeletlen papírt használunk. Oldószerelegyként vízzel telített butanolt, indikátor mirkoorganizmusként Micrococcus luteus-t használunk. Ebben a rendszerben az A-40 104 A-D komponensek Rf-értékei a 2. táblázatban megadottak. 2. táblázat A—40 104 komponens Rf-érték A 0,64 B 0,51 C 0,37 D JL 0,31 Az alábbiakban ismertetjük az A—40 104 antibiotikumkomplex elkülönítését. A találmány tárgyához tartozik az A-40 104 antibiotikum-komplex előállítása, ezen belül az A—40 104 A és B komponensek és az ismert pleuromutilin antibiotikum előállítása. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy egy Clitopilus pseudo-pinsitus basidiomiceta A-40 104 termelő törzset süllyesztett és levegőztetett fermentációs körülmények között előnyös táptalajon addig tenyésztünk, míg a táptalajban antibiotikum halmozódik fel. Az antibiotikum-komplexet és a komplexet felépítő komponenseket ismert izolálási és tisztítási eljárások segítségével különítjük el. Az A-40 104 antibiotikumokat termelő törzset Hollandiából a Centraalbureau voor Schimmelculture (CBS) gyűjteményből kaptuk. A CBS-től kapott tenyészet (CBS 270,36) Octojuga pseudo-pinsita-nak bizonyult. A jelen szabadalmi leírásban a Clitopilus nevet használjuk, amely az Octojuga névvel szinonima. Ezen tenyészet antibiotikum termelő képessége nem volt ismeretes. Kiterjedt szűrővizsgálatokat követően felfedeztük, hogy képes az A-40 104 antibiotikumok termelésére. Az A—40 104 A és B komponensek, továbbá a pleuromutilin termelésére használt Clitopilus pseudo-pinsitus törzset a Northern Marketing and Nutrition Research Division (U.S. Department of Agriculture, Agricultural Research Service, Peoria, Illinois, 61 604) törzsgyűjteményében letétbe helyeztük, ahol az NRRL 11 179 sorszámmal jelölték és ahonnan bárki elkérheti. Mint ahogy más mikroorganizmusoknál is előfordul, az A—40 104 antibiotikumot termelő Clitopilus pseudo-pinsitus NRRL 11179 törzs tulajdonságai v;íltoznak. Az NRRL 11 179 törzs mesterséges variánsait és mutánsait előállíthatjuk például különböző ismert mutagénekkel, mint például ultraibolya sugarakkal, röntgensugarakkal, nagyfrekvenciájú hullámokkal, radioaktív sugarakkal és vegyszerekkel. A találmány oltalmi köréhez tartoznak az összes természetes és mesterséges variánsok és mutánsok, amelyek a Clitopilus pseudo-pinsitus NRRL 11 179 mikroorganizmus meghatározó tulajdonságaival rendelkeznek. A Clitopilus pseudo-pinsitus NRRL 11 179 mikroorganizmus növesztéséhez használt táp'talajok sokfélék lehetnek. A termelés gazdaságossága, a legnagyobb termelés és a termék könnyű izolálása érdekében azonban bizonyos táptalajokat előnyösen hasz5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
