179422. lajstromszámú szabadalom • Eljárás DL-5-metil-tetrahidrofólsav és sói előállítására
7 179422 8 lítjuk. Ezután a szenet 100 liter eluálószerben szuszpendáljuk, amely az alábbi összetételű: 80 rész 2-metoxi-etanol, 20 rész (5% ciszteint tartalmazó) víz és 2 rész 34%-os ammóniumhidroxid-oldat. A szuszpenziót néhány percig keverjük, majd szűrjük és a szűrletet 20 liter térfogatúra pároljuk be. A sűrítményt 700 g kalicum-klorid 100 liter etanollal készült oldatába öntjük. Az 5-metil-tetrahidrofolsav kivált kalciumsóját szűrjük, etanollal mossuk és vákuumban szárítjuk. 2,3 kg 5-metil-tetrahidrofolsav-kalciumsót kapunk. Termelés 86%, a kiindulási folsav mennyiségére számolva. Tisztasága az alábbiakban részletezett vizsgálat alapján 100%. Az ultraibolya spektrofotometria a termék alábbi jellemzőit mutatja (pH = 7,e = 32 • 103): maximális abszorpció 290 nm-nél, minimális abszorpció 245 nm-nél, E290/E245 =3,8. Ha a terméket Sephadex DEAE A—25 gyantával töltött kromatografáló oszlopon Nixon és Bertino módszerével analizáljuk [P. F. Nixon és J. R. Bertino, Methods in Enzym., 18, 661 (1971)j, egyedül az 5-metil-tetrahidrofolsavnak megfelelő maximumot kapjuk. A nagynyomású folyadék-kromatográfiás analízis (Partisii-1 OSAX töltetű, 4,6 x 250 mm méretű oszlopon, 5%-os ammóniumcitrát eluálószerrel, 6-os pH-értéken) csak az 5-metil-tetrahidrofolsavnak megfelelő maximumot mutatja. MMR spektrum: az N5-CH3 csoport szingulettje T = 7,5 értéknél jelenik meg. A fenti módon előállított 1 kg 5-metil-tetrahidrofolsavkalciumsót 1 kg ciszteint tartalmazó 40 liter vízben oldunk, melegítés közben és nitrogénatmoszférában. Az oldat pH-ját 6-ra állítjuk be híg sósav-oldattal, és az elegyet hűtőszekrényben állni hagyjuk. A kivált 5-metil-tetrahidrofolsavat szűrjük, kevés hideg vízzel mossuk és megszárítjuk. A termék ultraibolya spektrofotometriás vizsgálatakor az E290/E24S hányados értéke 3,8, ennek alapján tisztasága 100%. A példában ismertetett fenti eljárást megismételjük, azonban az eluáló oldatban jelenlevő 2-metoxi-etanolt etanollal, 1-propanollal, 2-propanollal, n-butanollal, terc-butanollal, szek-butanollal illetve izobutanollal helyettesítjük. Mindegyik esetben a fentebb jellemzett terméket kapjuk, a megadott termeléssel. 2. példa 5-Metil-tetrahidrofolsav-nátriumsót állítunk elő az 1. példában ismertetett módon. A szenet az alábbi összetételű eleggyel eluáljuk: 80 rész metanol, 20 rész (5% redukált glutationt tartalmazó) víz, 2 rész 34%-os ammóniumhidroxid-oldat. Az aktív szén szűrése után az eluátumhoz kevés vízben oldott 700 g kalcium-kloridot adunk. A kiváló 5-metil-tetrahidrofolsav-kalciumsót szűrjük nitrogén áramban, majd etanollal mossuk és vákuumban szárítjuk. 2,1 kg terméket kapunk. Termelés 80%, a kiindulási folsavra számítva. A termék jellemzői megegyeznek az 1. példa szerint kapott termék jellemzőivel. 3. példa Az 1. példa szerinti eljárást megismételjük. A szén szűrőpogácsát olyan eluáló oldattal kezeljük, amely 2-propanolból és kevés ammónium-hidroxidot és ciszteint tartalmazó vízből áll, majd pedig a szűrt eluátumot 20 liter térfogatúra pároljuk be. A maradékot liofilizáljuk, és ilyen módon 2,1 kg 5-metil-tetrahidrofolsav-nátriumsót kapunk, 80%-os termeléssel. A termék ultraibolya spektrofotometriás vizsgálatakor az E290/E245 hányados értéke 3,8, ennek alapján tisztasága 100%. 4. példa Az 1. példában leírt módon járunk el egészen az eluátum betöményítéséig. A sűrítményt ezután 100 liter etanolban oldott 1,3 kg bárium-kloriddal kezeljük. Az 5-metil-tetrahidrofolsav-báriumsót 83%-os terméssel kapjuk. E290/E245 - 3,79. 5. példa Az 1. példában ismertetett módon járunk el egészen az eluátum betöményítéséig. A maradékot 100 liter etanolban oldott, 0,6 kg magnézium-kloriddal kezeljük. Az 5-metil-tetrahidrofolsav-magnéziumsót 82%-os termeléssel kapjuk. E290/E245 = 3,8. 6. példa 100 g 5-metil-tetrahidrofolsav-kalciumsót állítunk elő az 1. példában ismertetett módon, és 4 liter vízben oldjuk. Az oldathoz a sztöchiometriás mennyiségnek megfelelő nátrium-szulfátot adunk hozzá. A kivált kalciumszulfátot szűrjük, az éles szűrletet liofi lizáljuk. Ilyen módon 5-metil-tetrahidrofolsav-nátriumsót kapunk. E290/E245 = 3,8. 7. példa 2,50 kg folsavat 10 liter vízben szuszpendálunk, és keverés közben 1 liter 40%-os nátrium-karbonát-oldatot adunk a szuszpenzióhoz. A pH értékét nátrium-karbonáttal 7,8-re állítjuk be, majd lehűtés után 1700 kg nátrium-bór-hidridet adunk hozzá nitrogénatmoszférában. A reakcióelegyet 2 órán át reagáltatjuk körülbelül 70 °C-on, hogy a reakció teljessé váljon, majd 4 kg 37%-os vizes formaldehidet, és utána 0,80 kg nátrium-bór-hidridet adunk hozzá. A kivált nátrium-borátot szűrjük, és a nátrium-bór-hidrid feleslegét sósavval elbontjuk (az oldat sa5 10 15 20 25 30 35 40 45 .50 55 50 65 4
