179340. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás aminosavak előállítása során alkalmazható táptalaj előállítására
9 179340 10 roxid-oldattal 7,0-re állítjuk be. Ezután az 1. példával analóg módon a táptalajt beoltjuk a Brevibacterium 22 24 órás tenyészetének 750 ml-ével. A fermentáció közben 28-30 °C-on levegőztetünk, 1 m3 levegő/1 m3 táptalaj mennyiségben, 400—500 fordulat/perc keverési sebesség mellett. A fermentáció folyamán a pH-értéket vizes ammóniumhidroxid-oldat illetve kénsav hozzáadásával állandóan tartjuk. A fermentálás 60 óráig tart. Az L-lizin koncentrációja 22,4 g/liter, az aminosav kitermelés, a monoszacharidok elegyére számítva 32 súly%. A fermentálás befejezése után a fermentlét 4-5 pH-értékig megsavanyítjuk, és 0,2 súly% nátrium-hidrogénszulfít hozzáadásával stabilizáljuk. A stabilizált fermentlét porlasztva szárító berendezésen rnegszárítjuk. A késztermék nem higroszkópos, hosszú tárolás esetén sem tapad össze és nem válik csomóssá. 3. példa A lombos fák kétlépcsős, extrakciós hidrolízisének második lépésében kapott hidrolizátumot, amely 2,26 súly% hexóz-monoszacharidot és 0,14 súly% pentóz-monoszacharidot tartalmaz, 3,7 pH-értékig semlegesítjük, szűrjük, majd vákuumban, 80 °C-on bepároljuk mindaddig, míg a monoszacharid koncentrációja 9 súly% nem lesz. A monoszacharidok bepárolt oldatát a levegő oxigénjével 45 °C-on, aktív szén jelenlétében 60 percen át oxidáljuk, majd szűrjük az elegyet. A gáz-folyadék kromatográfiás mérés szerint a tisztítással a furfurolt teljesen eltávolítjuk az elegyből. A hidroximetil-furfurol és a lignohumin-anyagok koncentrációja a tisztított oldatban, 1,8 súly% a monoszacharidok súlyára számítva. Ezt a koncentrációt az oldatban a tisztítás előtt és után végrehajtott spektrofotometriás analízissel határoztuk meg. A monoszacharidok tisztított oldatának 660 ml-nyi mennyiségéhez nitrogénforrást, ásványi sókat és növekedési anyagokat adunk, az 1. példával analóg mennyiségben és módon. Ezután a táptalaj térfogatát vízzel 1 literre töltjük fel. A fermentálást az 1. példában leírt módon rázólombikokban hajtjuk végre. Az L-lizin koncentrációja 21,1 mg/ml, az aminosav kitermelés, a monoszacharidok elegyének súlyára viszonyítva 28 súly%. 4. példa Egy tűlevelűek egy lépéses hidrolízisével kapott hidrolizátumot, amely 2,55 sűly% hexóz-monoszacharidot és 0,25 súly% pentóz-monoszacharidot tartalmaz, 3,4 pH-értékig semlegesítünk, majd szűrjük az elegyet, és vákuumban, 75 °C-on bepároljuk úgy, hogy a monoszacharidok koncentrációja bepárlás után 10 súly% legyen. A bepárolt oldatot a levegő oxigénjével kalciumhidroxid jelenlétében, 45 °C-on 60 percig oxidáljuk. A keletkezett csapadékot kiszűrjük. A kapott, tisztított oldat a gáz-folyadék kromatográfiás mérések szerint furfurolt egyáltalán nem tartalmaz. A hidroximetil-furfurol és a lignohumin-anyagok mennyisége együttesen 1,8 súly%, a monoszacharidok súlyára vonatkoztatva. Ezt a koncentrációt spektrofotometriásán határoztuk meg. 860 ml tisztított monoszacharid oldathoz 25 g ammónium-szulfátot, 0,5 g kálium-hidrogénszulfátot, 0,5 g kálium-dihidrogénszulfátot és 0,4 g magnézium-szulfát-heptahidrátot adunk, majd az elegyet vízzel feltöltjük^ literre. A pH-értéket vizes ammóniumhidroxid-oldattal 7,0-re állítjuk be. A kapott táptalajt 50 ml-es adagokban 750 ml térfogatú rázólombikokba töltjük. Az egyes lombikokba 1 — 1 g talkumot adunk, majd a lombikok tartalmát 0,8 at túlnyomáson 30 percen át sterilizáljuk. A táptalajt 2,5 ml 24 órás Brevibacterium flavum ATCC 14067 tenyészettel oltjuk be. Az oltótenyészetet a következő összetételű táptalajon hozzuk létre. 2,0 súly% glükóz, 2,0 súly% kukorica extraktum, 0,3 súly% nátriumklorid. A táptalaj pH-értéke 7,0-7,2. A táptalajt 808 mbar tiilnyomáson 40 percen át sterilizáljuk. A tenyésztés rázólombikban, 28-30 °C-on, 24 órán át történik. Az alkalmazott mikroorganizmus: Brevibacterium flavum ATCC 14067. A fő-fermentálást rázógépen, 28—30 °C-on, fordulat/perc keverési sebesség mellett 72 órán át végezzük. Az L-glutaminsav koncentrációja 42 mg/ml, az aminosav kitermelése 49 súly% a monoszacharidok súlyára vonatkoztatva. 5 példa Egy lombos fák kétlépcsős extrakciós hidrolízisének második lépésében kapott hidrolizátumot, amely 2,23 súly% hexóz-monoszacharidot és 0,17 suly% pentóz-monoszacharidot tartalmaz, 3,6 pH-értékig semlegesítünk, majd az elegyet szűrjük, és vákuumban, 72 °C-on bepároljuk úgy, hogy a betöményített oldatban a monoszacharidok koncentrációja 10 súly% legyen. A monoszacharidok bepárolt elegyét a levegő oxigénjével, 45 °C-on, aktív szén jelenlétében 30 percen át oxidáljuk, majd az aktív szenet kiszűrjük. A folyadék-gáz kromatográfiás mérés szerint a tisztított oldat furfurolt egyáltalán nem tartalmaz. A tisztított oldatban a hidroximetil-furfurol és a lignohumin-anyag koncentrációja spektrofotometriásán meghatározva 2,2 súly% a monoszacharidok súlyára vonatkoztatva. A monoszacharidok tisztított oldatának 15 liternyi mennyiségéhez 450 g ammónium-szulfátot, 7,5 g kálium-hidrogénfoszfátot, 7,5 g kálium-dihidrogénfoszfátot és 6 g magnéziumszulfát heptahidrátot adunk. A kapott táptalajt 30 literes fermentorba töltjük és 30 percen át 1010 mbar túlnyomáson sterilizáljuk. Ezután hozzáadjuk a Brevibacterium flavum ATCC 14067 24 órás tenyészetének 750ml-ét. Az oltóanyagot a 4. példában ismertetettel analóg módon állítjuk elő. A fő-fermentálást 30—32 °C-on, 200 fordulat/perc keverési sebességgel, a táptalaj 1 m3-ére számítva 1 m3 levegő felhasználással, 56 órán át végezzük. A fermentálás alatt a táptalaj pH-értékét vizes ammónium-hidroxid oldattal állandó értéken 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
