179314. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új androsztán-17béta-tiokarbonsavészterek előállítására
15 179314 16 Stoughton/McKenzie féle érösszehúzásos módszerrel [a módszert Place, V.A., Velasquez, J.G. és Burdick, K.H. ismertetik az Arch. Dermat., 101., 531-537 (1970) szakirodalmi helyen] vizsgáljuk. Nyolc normál felnőtt embert kezelünk mindkét alsókaijukon, 4-4 helyen topikálisan, olyan alkoholos oldatokkal, amelyek a kísérleti vegyületeket 1 ' 10"5 g/ml és 1 • 10-6 g/ml koncentrációban tartalmazzák. így egy kísérleti vegyidet vizsgálatára 64 kísérleti hely, illetve egyféle koncentráció vizsgálatára 32 kísérleti hely jut. A kísérleti személy alsókarján szilikonzsírral bevont radírral 7 c 7 mm-es kísérleti területeket jelölünk ki, majd a területekre a kísérleti oldatokból 10—10 mikrolitert juttatunk. Miután a kísérleti oldat a kísérleti területre rászárad, mindegyik kísérleti területet Saran márkájú kendővel borítjuk, a kendő széleit ragtapasszal rögzítve. A védőkendőt 18 óra elteltével eltávolítjuk. 24 óra elteltével az érösszehúzódás meglétét két független megfigyelő vizuálisan állapítja meg, majd a kísérleti helyek össz-számához viszonyítva a választ adó (azaz érösszehúzódást mutató) helyek számát megadja. Az érösszehúzódás intenzitása is értékelésre kerül 0, 1 és 2 skálaértékekből álló skála alapján, ahol a 2-es érték utal a legintenzívebb válaszra. Mindkét értékelési eredményt felhasználjuk ezután dózisválaszgörbék alkotásához Place, V.A. és munkatársai korábban már említett cikkében ismertetett módon. A találmány szerinti, A és C betűkkel jelzett vegyüle teket közvetlenül hasonlítjuk össze a technika állási szerint ismert, B és D betűkkel jelzett vegyületekkel. A timolitikus aktivitásra vizsgálandó vegyületeknek — beleértve az összehasonlításképpen vett hidrokortizont is - elkészítjük két vagy többféle koncentrációjú szuszpenzióját nátrium-karboximetil-cellulóz hordozóval. Ezekből a szuszpenziókból ezután három egymást követő napon 0,5-0,5 ml-t adunk be szubkután injekció formájában kísérleti patkányoknak. Az utolsó injektálás után 4 órával az állatokat leöljük, majd mindegyikük csecsemőmirigyét eltávolítjuk és súlyukat megmérjük. Ezeket a súlyadatokat használjuk fel dózisválaszgörbék felrajzolásához a technika állása szerint ismert módszerekkel. A kísérleti vegyületek közül csak az egyik pár mutat mérhető aktivitást, a többi vegyület a hidrokortizon (azaz az összehasonlító vegyület) dózistartományában nem mutat aktivitást és így inaktívnak (vagyis a hatékonyságot illetően a hidrokortizon aktivitásának felénél kisebb aktivitásúnak) tekinthető. Az 1. táblázatban közölt összehasonlító elemzés során két találmány szerinti, metoxitiokarbonilcsoportot hordozó vegyületet, vagyis az A és a C vegyületet a hozzájuk legközelebb álló oxigéntartalmú analógokkal, vagyis a metoxikarbonilcsoportot hordozó B és D vegyületekkel hasonlítjuk össze. Az eredményekből látható, hogy a tioészteranalógok kiváló topikális hatásúak csekély vagy egyáltalán nem jelentkező szisztémikus hatás mellett, ugyanakkor egyértelműen kedvezőbbek terápiásán, mint a normál oxoészter-analógok. Ez a terápiás többletbatás meglepő és váratlan. 1. táblázat Patkány- grössze- Terápiás -csecsemő- h^cSdás többletroútgy (V) hatás (T) A = 6a,9a-difluor-1 lß-hidroxi-3-oxo- 16a-metil-17a-pro - pioniloxi-androszta-l,4-dién-170-tiokarbonsav-metilészter 1 0,8 32 B = 6a,9a-difluor-110-hidroxi-3-oxo-16a-metil-17a-propioniloxi-androszta-l,4-dién-17d-karbonsav-metilészter 40 1 C = 6a,9a-difluor-1 lß-hidroxi-3-oxo-16a,17a-izopropilidéndioxi-andro szta-1,4-dién-17/3-tiokar bonsav-metüészter inaktív 10 10 D = 6a,9a-difluor-1 lß-hidroxi-3-oxo-16a, 17a-izopropilidéndioxi-androszta-l,4-dién-170-kar-bonsav-metilészter inaktív 1 Az A és a B vegyület összehasonlításakor a terápiás többlethatást a következő egyenlőség alapján számítjuk ki: V (A vegy.) V (B vegy.) _ 0,8 1 T (A vegy.) T (B vegy.) 1,0 40 Tekintettel arra, hogy a C vegyület inaktívnak bizonyul a patkány-csecsemőmirigy (T) tesztben, a terápiás többlethatás a másik kísérletből adódik. 8. példa Ebben a példában a következőkben megadott összetételű gyógyászati készítmény előállítását ismertetjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
