179290. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baromfipestis elleni oltóanyag előállítására
5 179290 6 2. példa , A P/77/8 NDV-törzs biológiai jellemzőinek vizsgálata a) Hőmérsékletérzékeny jelleg vizsgálata: Egyrétegű csirkeembrió-kötőszövetet P/77/8, P/76/5, illetve La Sota törzzsel oltunk be, és a beoltott sejteket 5 napon át 35 °C-on, illetve 41 °C~ on inkubáljuk. Az észlelt fertőzési faktorokat az 1. táblázatban soroljuk fel. 1. táblázat Fertőzési faktor* 1UIZ5 35 °C-on 41 °C-on A 35 °C/41 °C La Sota 5,1 5,0 0,1 P/76/5 5,4 3,6 1,8 P/77/8 5,4 5,3 0,1 *logi o TCIDs o/0,05 ml egységekben kifejezve. Az 1. táblázat adatai azt igazolják, hogy a P/77/8 törzs már nem rendelkezik a P/76/5 törzsre jellemző hőmérsékletérzékenységgel. b) Hidegtűrő jelleg vizsgálata: Embriót tartalmazó tojásokat 103,sEIDso vizsgálandó vírussal oltunk be, és a tojásokat 26 °C-on, illetve 35 °C-on inkubáljuk. A képződött vírusokat 2 nap elteltével összegyűjtjük, és 5 pg/ml tripszin jelenlétében 35 °C-on csirkeembrió-kötőszöveten titráljuk. Az észlelt eredményeket a 2. táblázatban közöljük. 2. táblázat Vírushozam* Törzs ------------------------------------------26 °C-on 35 °C-on La Sota 0,5 8,4 P/76/5 1,7 5,9 P/77/8 0,7 6,6 *Csirkeembrió-kötőszöveten végzett titrálással meghatározott és logi o'TCIDs o/0,05 ml egységekben kifejezett értékek. A 2. táblázat adatai azt igazolják, hogy a P/77/8 törzs már nem rendelkezik az alaptörzsre (azaz a P/76/5 törzsre) jellemző hidegtűrő jelleggel. c) A P/77/8 törzs fertőzőképességének meghatározása csirkeembrió-kötőszöveten, és a tripszin fertőzőképességet fokozó hatásának vizsgálata: A P/77/8 törzs fertőzőképességét csirkeembrió-kötőszöveten vizsgáljuk. Az észlelt adatokat olyan egyéb törzsek fertőzőképességi adataival hasonlítjuk össze, amelyek patogenicitási foka jól ismert érték [Y. Nagai és munkatársai: Virology 72, 494 (1976)]. A csirkeembrió-kötőszöveten fellépő fertőzőképesség csökkenését a csirkeembrió-kötőszöveten mért fertőzési faktor és a tojáson mért fertőzési faktor különbségével jellemezzük. A vizsgált vírusok csirkeembrió-kötőszöveten mutatott fertőzőképességét tripszin jelenlétében is meghatározzuk, és kiszámítjuk a tripszin hatására bekövetkező fertőzési faktor-növekedést. Az észlelt eredményeket a 3. táblázatban közöljük. 3. táblázat Törzs Tojáson és csirkeembrió-kötőszöveten mért fertőzési faktor különbsége (*) Tripszin jelenlétében és távollétében . csirkeembrió-kötőszöveten mért fertőzési faktor különbsége (*) Essex Herts 0,8 ± 0,1 1,1 ±0,2-0,1 ±0,4 0,0 ± 0,1 La Sota Bl 2.1 ± 0,3 2.1 ± 0,2 1,4 ± 0,2 1,8 ±0,1 Ulster P/77/8 3,2 ± 0,4 3,5 ± 0,2 2.3 ±0,1 2.4 ± 0,2 *log10ID5o/0,l ml egységekben kifejezett értékek (IDso - csirkeembrió-kötőszöveten meghatározott 50%-ban fertőző dózis), a standard deviáció-értékekkel együtt. A 3. táblázatban felsorolt adatok alapján a vizsgált törzseket három csoportba sorolhatjuk. Az adatok azt is igazolják, hogy a P/77/8 törzs jelentős mértékben eltér a La Sota törzstől, a P/77/8 törzs csirkeembrió-kötőszöveten mért fertőzőképessége ugyanis jelentős mértékben csökkent, ugyanakkor azonban a fertőzőképesség tripszinnel lényegesen nagyobb mértékben fokozható, mint a La Sota törzs esetén. d) A virus-hemagglutinin hőérzékenységének vizsgálata: A virus-hemagglutinin hőérzékenységének meghatározása céljából a 4. táblázatban felsorolt törzseket, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
