179290. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baromfipestis elleni oltóanyag előállítására
7 179290 8 azaz a P/77/8 törzset, a patogén Essex törzset és a legyengített La Sota törzset különböző ideig különböző hőmérsékletek hatásának tesszük ki. A hemagglutinin hőérzékenységét a hemagglutinációs faktor reciprokával jellemezzük. Az észlelt eredményeket a 4. táblázatban közöljük. \í~ 4. táblázat Kezelés Kezelés Vizsgált törzsek aumcrséklete íueje Essex La Sota P/77/8 22 °C 0 perc 256 1024 1024 60 perc 128 1024 1024 u o O kT> 10 perc 256 256 512 20 perc 256 64 256 30 perc 256 8 8 40 perc 256 >2 >2 60 perc 256 >2 >2 56 °C 2 perc 256 256 128 5 perc 256 >2 >2 10 perc 256 >2 >2 Az adatokból megállapítható, hogy a P/77/8 törzs hemagglutininjének hőérzékenysége azonos a La Sota törzs hemagglutininjének hőérzékenységével. e) pH-érzékenység vizsgálata: A P/77/8 törzs és a La Sota törzs pH-érzékenységének összehasonlítása érdekében a vizsgálandó törzseket 4 órán át 35 °C-on különböző pH-értékű közegekben tartjuk, majd meghatározzuk a törzsek maradék fertőzési faktorát. Az észlelt eredményeket az 5. táblázatban közöljük. 5. táblázat Fertőzési faktor* PH La Sota P/77/8 7 5,5 5,5 5 5,4 5,2 3 0 0 ♦Csirkeembrió-kötőszöveten meghatározott, logi 0 TCIDso/0,05 ml egységekben kifejezett értékek (kezdeti fertőzési faktor: 5,5). Az 5. táblázat adataiból megállapítható, hogy i P/77/8 törzs pH-érzékeny_sége hasonló a La Sota törzséhez. 3. példa Az 1. példában közöltek szerint előállított oltóte nyészettel specifikus, patogénmentes, embriót tartalmazó tojásokat oltunk be, és a tojásokat 3 napon ái 35 °C-on inkubáljuk. A felső folyadékfázist összegyűjtjük, és 10 vegyes % peptont, 3 vegyes % arginint és 5 vegyes % szacharózt tartalmazó stabilizáló folyadékkal elegyítjük. Az elegyet 5 ml-es üvegfiolákba töltjük (minden egyes fiolába 106 EIDSo/ml vírust töltünk), majd fagyasztva szárítjuk. A fiolákat szorosan ledugaszoljuk. Többszörös dózist tartalmazó, aeroszol formájában beadható vakcinát kapunk. 4. példa A P/77/8 törzzsel in vivo körülmények között végzett kísérletek a) A törzs patogén jellegének vizsgálata: Elkülönített ketrecben tartott, specifikus patogénmentes 1 napos csirkéket 50 ml P/77/8 vakcinával kezelünk (koncentráció: 107,s EID5O/0,5 ml). A vakcinát Turbair aeroszol-permetezőberendezéssel (gyártja a Turbair Ltd., Britannica Works, Waltham Abbey, Essex, Nagy-Britannia) juttatjuk a légtérbe. A csirkéket 10 napig tartjuk megfigyelés alatt, összehasonlítás céljából 1 napos specifikus patogénmentes csirkéket ugyanilyen körülmények között La Sota törzset tartalmazó vakcinával kezelünk. Az észlelt eredményeket a 6. táblázatban közöljük. 6. táblázat Törzs Állatszám Patogenicitási index (*) Átlag 95%-os megbízhatósági határértékek La Sota 20 0,45 0,325 0,15-0.554 10 0,20 9 0,58 10 0,20 20 0,33 P/77/8 10 0,00 0,020 0,000-0,069 20 0,02 10 0,04 *A patogenicitási indexet a 10 napos megfigyelési időszak alatt észlelt pusztulások, illetve megbetegedések adataiból számítjuk ki. Az egészséges állatok számát (n0J 0-val, a megbetegedett állatok számát (ni) 1-gyel, az elpusztult állatok számát (n2) 2-vel szorozzuk. A patogenicitási indexet (Pl) a következő egyenletből kapjuk. 0 x n0 + 1 x ni + 2 x n2 Pl =-------------------------------no + ni + n2 A 6. táblázat adatai azt igazolják, hogy a P/77/8 törzs aeroszolos adagolás esetén egynapos csirkékkel szemben lényegesen kisebb mértékben fejt ki ártalmas hatást, mint a La Sota törzs. 5 10 15 20 2'5 30 35 40 45 50 55 60 65 4
