179147. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására fermentléből
179147 nál adazbéna ként azilikagélt, kifejlesztő elegyként metiletilketoni etanol: 25 %-os ammonium-hidroxid /1:1:1/ elegyet alkalmazunk. A kromatogramot 0,5 %-os acetonos ninhidrin-oldattal hívjuk elő. A sziszomicint tartalmazó frakciókat egyesítjük, és az igy kapott 200 ml oldatot vákuumban, 50-60 0° hőmérsékleten 20 ml térfogatra bepáróljuk. Ezután az oldat pH-ját 5 n kénsavoldattal állítjuk, ma^d az oldathoz 165 mg aktívszenet adunk. Az elegyet 15 percen át keverjük, majd leszűrjük. A szürletet 75 ml ammónium-formáju Amberlite GG-50-I gyantát tartalmazó oszlopra /oszlop átmérő 2,8 cm, gyanta rétegmagasság 21 cm/ visszük fel. A gyantaoszlopot 500 ml ionmentes vízzel mossuk, majd 150 ml/óra sebességgel, összesen 1500 ml 0,1 n ammónium-hidroxid oldattal a kísérő, szennyező aminoglükozidokat és egyéb bioszintézis termékeket leoldjuk. Ezután 600 ml 0,2 n ammónium-hidroxid oldattal leoldjuk a sziszomicint, ugyancsak 150 ml/óra sebességgel. Az eluálás során 15 ml-es frakciókat szedünk. A frakciókat vékonyrétegkromatográfiás módszerrel analizáljuk. A vizsgálat során szilikagél adszorbenst és a következő két futtatórendszert glkalmazzuk: metiletilketonsetanol: 25%-os ammónium-hidroxid /lslsl/, kloroform:metanol:25%-os ammónium-hidroxid /l:lsl/, alsófázis. A csak sziszomicint tartalmazó frakciókat egyesitjük, és. vákuumban 50-60 C°-on bepároljuk. A bepárlási maradékot etanol-benzol /1:1/ eleggyel vízmentesitjük, és vákuumban foszforpentoxid felett súlyállandóságig szárítjuk. így 2,25 g sziszomicin bázist kapunk. Átkristályositás után: op: 198-201 Co.JpóJ^ = +138° /c - 0,5, viz/. Infravörös spektrum /KBr/:O0H, EH 3170-5360, ^CH=C0C 1690, 9C0C 1060 cnH-. BáR-spektrum /D90/:oC1,20 /Me-4". s 3H/,cC2,50 /Me-H-3", a 3H/, d2,56 /H-3", d, Jg” 3«» = 10 Hz, ÍH/,dT3,17 /H-6», széles s, 2H/, 63,3° /Hax-5", d, J’ =12HzilH/, <<3,80 /H-2", dd, J2„ ,„=10 Hz Jr,t2»= 4Hz, 1H/T<<4,04 /He-5"*^Jgem= 12Hz, lH/,</4,88 /H-4», széles t, lH/,(<5,09 /H-l", d, Jr,>2" =4 Hz» W,<<5,35 /H-1», d, Ji* g, = 2 Hz, 1H/ ppm. Tömegspektrum: molekulasúly: 447 A jellemző ionok tömegszáma /m/e/: 447» 352, 304, 160, 145, 127» 118, 110, 100. 2. példa Mi cromon os por a danubiens is /MG 171/ törzzsel előállított 10 liter térfogatú, 410 ^ug/ml biológiai aktivitású fermentléhez 300 g ammónium-szulfatot adagolunk keverés közben. Miután a só feloldódott, a fermentlé pH-ját 10 n kénsavoldattal keverés közben 2-re állítjuk be. A savas fermentlét 30 percig keverjük, majd leszűrjük. A leszűrt micéliumot 3,5 liter vízzel átmossuk és a mosófolyadékot a szürlettel egyesitjük. Az igy kapott 11,9 liter szürlet pH-ját 25 % ammónium-hidroxid oldattal 7-*e állítjuk be. Ezután a semleges szürlethez addig adagolunk telitett vizes oxálsav oldatot, amig a kalcium-ionok teljes leválasztását el nem érjük. Ezután a savas oldatot 15 percig keverjük, majd pH-ját 25 %-os ammónium-hidroxid oldattal 7-re állitjuk be. A kivált csapadékot kiszűrjük, majd 300 ml vízzel mossuk. Ily módon 12,1 liter 275 /Ug/ml aktivitású szürletet kapunk. Ezt 150 ml, semlegesre mosott, ammónium-formáju Wofatit CP-300 6
