179147. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására fermentléből
179147 > ioncserélő gyantát tartalmazó oszlopon /oszlop átmérő 3 cm. gyantarétegmagasság 24 cm/ folyatlak át 1000 ml/óra sebességgel. A megkötés befejeztével a gyantaágyat 500 ml ionmentes vizzel mossuk. A leoldáat 400 ml 2 n ammónium-hldroxid oldattal végezzük, 200 ml/óra sebességgel. Az eluálás során 20 ml-es frakciókat szedünk. A frakciókban a sziszomicint az 1. példában leirt módon mutatjuk ki. A sziszomicint tartalmazó frakciókat egyesit jük, és az igy kapott 180 ml oldatot vákuumban, 50-60 Cr hőmérsékleten 20 ml térfogatra bepároljuk. Ezután az oldat pH-ját 5 n kénsav-oldattal 7»5-£e állítjuk és 75 ml ammónium-formánu Amberlite CG-50-I gyantát tartalmazó oszlopra /oszlop-átmérő 2,8 cm, gyanta-rétegmagasság 21 cm/ visszük fel. A gyantaoszlopot 500 ml ionmentes vizzel mossuk, majd 150 ml/óra sebességgel összesen^2100 ml 0,07 a ammónium-hidroxid oldattal a kisérő, szennyező aminoglükozidokat és egyéb bioszintézis termékeket leoldjuk. Ezután 450 ml 0,25 n ammónium-hidroxid oldattal leoldjuk a sziszomicint, ugyancsak 150 ml/óra sebességgel. Az eluálás során 15 ml-es frakciókat szedünk. Az 1. példában ismertetett rétegkromatográfiás analízis szerint a csak sziszomicint tartalmazó frakciókat egyes itjük és vákuumban 50-60 G-on bepárol juk. A bepárlási maradékot etanol-benzol /1:1/ eleggyel vizmentesitjük, és vákuumban foszforpent-oxid felett sulyallandóságig szárítjuk. így 2,2 g sziszomicin bázist kapunk. 5. példa A Micromonospora rosea /MEG 182/ törzzsel előállított 10 liter térfogatú, 500 ,ug/ml biológiai aktivitású fermentléhez 5OO g ammónium-szulfátot adagolunk, majd keverés közben a fermentlé hőmérsékletét 90 C°-ra emeljük. A fermentlevet 15 percig ezen a hőmérsékleten keverjük, majd leszűrjük. A leszűrt micéliumot 5,5 liter vizzel mossuk, ezután a mosófolyadékot a szűré lettel egyesítjük. A kapott 10 liter egyesitett szürlethez addig adagolunk szilárd ammónium-oxalátot. amig a kalcium-ionok teljes leválasztását el nem érjük. Ezután a csapadékos oldatot 15 percig keverjük, majd leszűrjük. A kivált csapadékot 300 ml vizzel mossuk. így 10,2 liter 390 /Ug/ml aktivitású szürletet kapunk. Ezt 200 ml semlegesre mosott ammónium-formáju Wofatit . CP-300 gyantát tartalmazó oszlopon kötjük meg a 2. példában leírtak szerint. A továbbiakban is a 2. példa szerint járunk el, 3 igy 3,0 sziszomicin bázist kapunk. 4. példa Micromonospora rosea /MNG 182/ törzzsel előállított 10 liter térfogatú. 600 ,ug/ml biológiai aktivitású fermentlé pH- ját 25 %-os ammónium-hidroxid oldattal keverés közben 10-re állítjuk be. A lúgos fermentlét 30 percig keverjük, majd leszűrjük. A leszűrt micéliumot 3,5 liter vizzel mossuk, majd a kapott 11 liter egyesitett szürlethez addig adagolunk ammóniumoxalátot, amig a kalcium-ionok teljes leválasztását el nem érjük. Ezután a lúgos oldatot 15 percig keverjük? majd pH-ját 5n kénsav-oldattal 7-re állítjuk. A kivált csapadekot leszűrjük, majd 500 ml vizzel mossuk. így 11,5 liter 34-5 /Ug/ml aktivitás szürletet kapunk. Ezt 180 ml semlegesre mosott'ammónium-formáj Varion ECO ioncserélő gyantát tartalmazó lebegőágyas oszlopon /oszlop átmérő 2,8 cm, gyantarétegmagasság 32.5 cm/ folyatjuk át 500 ml/óra sebességgel. A megkötés befejezése után a lebegő 7 p P
