179147. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására fermentléből
179147 A saissonicinnek. a fermentlé ssürlétéből való megkötésére előnyösen alkalmazhatók a Varion KCG /Nitrokémiai Ipartelepek, Fűzi őgy ár telep/j a Woiatit CP-500 /VF B Farbenfabrik VJolfen, DDK/ kationcser elő gyanták. A gyantáról előnyös annónium-hidroxiddal leoldaui a sziszomicint. Tapasztalataink szerint 2 n anraónj.um-hidroxid oldatot alkalmazva a ssiszomicin kis térfogatben eluálható. A szissomicint kisérő antibiotikumoktól és bioszintézis termékektől egy finom szemcséjű karboxil-tipusu kationcserélő, előnyösen Amberlite CG-50-I /Rohm and Haas, Philadelphia, UFA/ gyantaoszlopon kivitelezett egyszerű kr ómat ográíiával választjuk el. Az oszlopról 0,05-0,12 n előnyösen 0,1 n ammóniuii-hidroxiddal eluálhatók a sziszomicint kisérő antibiotikumok és egyéb bioszintézis termékek, majd 0,18-0.25 n előnyösen 0,2 n ammónium-hidroxid oldattal pedig tisztán a sziszomicin oldható le. Megállapítottuk, hogy a Micromonospora rosea és Micromonospora danubiensis törzsek által bioszintetizált antibiotikum elegy a sziszomicin mellett kb. 15 % kis érő antibiotikumot tartalmaz. Az előállított sziszomicin bázist a találmány szerint kívánt esetben előbb pamoinsavval vagy annak alkálifém- vagy ammónium-sóival reagáltakjuk, majd ezután alakitjuk farmakológiailag elfogadható sóvá valamely alkalmas szervetlen savval, előnyösen kénsavval. A találmány szerinti eljárás legfontosabb előnye, hogy egyszerűen kivitelezhető, kevesebb műveleti lépéssel az ismert eljárásoknál lényegesen magasabb, 60-70 %-os kitermelést biztosit a sziszomicin végtermékre. A találmány szerinti eljárás további előnye az is, hogy ezzel az eljárással olyan sziszomicin, illetve farmakológiailag elfogadható sziszomicin-sók állíthatók elő, melyek gyógyászati tisztaságuak, tehát közvetlenül gyógyászati felhasználás céljára alkalmasak. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: 1. példa Micromonospora rosea /MNG 182/ törzzsel előállított 10 liter térfogatú, 400 /ug/ml biológiai aktivitású fermentléhez 500 g aramonium-szulfátot adagolunk keverés közben. Miután a só feloldódott, a fermentlé pH-ját 10 n kénsavoldattal keverés közben 2-re állítjuk be. A savas fér mentiét 50 percig keverjük, majd leszűrjük,. A leszűrt micéliumot 5,5 liter vizzel átmossuk, ás a mosófolyadékot a szűriét tel egyesitjük. A kapott 11,5 liter szűriét pH-ját 25 %-os ammónium-hidroxid oldattal 7-*e állítjuk be. Ezután a semleges szürlethez addig adagolunk telitett vizes oxálsav oldatot, amig a kalcium-ionok teljes leválasztását el nem érjük. Ezután a savas oldatot 15 percig keverjük, majd pH-ját 25 %-os ammónium-hidroxid oldattal 7-*e állítjuk be. A kivált csapadékot kiszűrjük, majd 500 ml vizzel mossuk. Ily módon 11,8 liter 280 /ug/ml aktivitású szürletet kapunk. Ezt 150 ml semlegesre mosott ammónium-formáju Yárion ECO ioncserélő gyantát tartalmazó oszlopon /oszlop átmérő 5 cm. gyanta rétegmagasság 24 cm/ folyatjuk át 1000 ml/óra sebesseggel. A megkötés befejeztével a gyantaágyat 500 ml ionmentes vizzel mossuk. A leoldáat 400 ml 2n ammóniumhidroxid oldattal végezzük 200 ml/óra sebességgel. Az eluálás során 20 ml-es frakciókat szedünk. A frakciókban a sziszomicint ninhidrines cseppreakcióval mutatjuk ki. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat-5
