179147. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására fermentléből
179147 Megállapítottuk továbbá, hogy az alkálifém és ammóniumsók illetve bázisok adagolásával előkezelt fermentlé szürletéből a sziszomicint tartalmazó antibiotikum elegy kationcserélő gyantán való megkötéssel elkülöníthető, és az igy nyert antibiotikum elegyből kationcserélő oszlopon végzett egyszerű kromatografálással, egy lépésben gyógyászati tisztaságú aziszomicin bázis állítható elő. A fentiek alapján a találmány tárgya eljárás gyógyászati tisztaságú sziszomicin bázis és farmakológiailag elfogadható sói előállítás ára sziszomicint termelő Micromonospora fajok, előnyösen a Micromonospora danubiens is /MEG 171/ vagy a Micromonospora rosea /MEG 182/. törzseivel előállított fermentlevekből a mi— céliumot tartalmazó fermentlé szűrésével, majd az antibiotikum kationcserélő oszlopon való megkötésével és azt követő elucióval és az igy kapott nyers termék kromatográfálásával és kívánt esetben azt követő sóképzéssel, oly módon, hogy a fermentléhez a szűrés előtt egy vagy több alkálifém- vagy ammóniumsót és/vagy bázist adunk és a kationcserélő oszlopról kapott sziszomicin bázis tartalmú eluátumot vagy kívánt esetben a kipreparált és feloldott sziszomicin bázist ismét kationcserélő gyantára visszük, majd a gyantáról a kisérő antibiotikumokat 0,05-0,12 n, előnyösen 0,1 n koncentrációjú ammónium-hidroxid oldattal leoldjuk, azután 0,18-0,25-előnyösen 0,2 n koncentrációjú ammóniumhidroxid oldattal elualjuk a sziszomicin bázist, a kapott eluátumból kiVánt esetben a vizet eltávolítjuk, kivant esetben a sziszomicin bázist pamoinsavval vagy alkálifém- vagy ammónlum-pamoáttal való reagáltatás után valamely szervetlen savval, előnyösen kénsavval reagáltatjuk. Alkálifémsóként előnyösen nátrium-klorid, kálium-klorid^ nátrium-szulfát alkalmazható. Az ammóniumsók közül legelőnyösebb az ammónium-klorid és az ammónium-szulfát. Bázisként szervetlen vagy szerves bázisok, mint például nátrium-hidroxid. kálium-hidroxid>ammónium-hidroxid vagy trietil-amin alkalmazhatok előnyösen. A találmány egyik előnyös kiviteli módja szerint úgy járunk el, hogy a fermentlé térfogatára számított 1-10 % előnyösen 3-5% mennyiségű ammónium-szulfátot adagolunk a fermentléhez. A találmány egy másik kiviteli módja szerint ammónium-hidroxiddal a pH-t 9-H-*e állítva visszük oldatba a mikroorganizmus sejtjeihez kötött sziszomicint. A fermentlé szőriétében levő, az ioncserélő gyantán való megkötést zavaró kalcium-ionokat oxalát formában előnyös leválasztani. Ha oxálsavval végezzük a leválasztást, az oxálsav adagolása után célszerű az oldat pH-ját 7-re állítani és ezután leszűrni a kalcium-oxalát csapadékot. Semleges és lúgos kémhatásu szürletből ammónium-oxalát adagolásával választhatok le kedvezően a kalcium-ionok. A fermentlé szürletéből a sziszomicint ammónium- vagy nátrium-formáju karboxil-tipusu kationcserélő gyantán kötjük meg. A kationcserélő gyantán megkötött sziszomicint leoldva, majd ioncserélő kromatográfiás módszerrel tisztítva a korábban leirt eljárásoknál egyszerűbben és kedvezőbb hozammal jutunk gyógyászati tisztaságú /I %-nál kevesebb szennyezést tartalmazó/ szimzomicinhez. /J.S. Simpson: Microbiological Assay Using Large Plate Methods, Analytical Microbiology, Acad, Press. New York 1963, 87-124. old./ 4
