179145. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására mikrobiológiai úton, micromonospora danubiensis-szel
179.145 6. példa 5 g, a 4. példa szerint előállított sziszomioin bázist 40 ml ionmentes vízben feloldunk, majd a kapott oldathoz keverés közben 7,16 S dipiridin-szulfátot adunk* A reakció-elegyet 15 peredig kevertetjük, majd vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékhoz abszolút toluolt adunk, majd az oldószert vákuumban lepároljuk. A bepárlási maradékot 20 ml ionmentes viztben oldjuk, majd a kapott oldathoz 0,5 g aktiv szenet adunk. Az elgyet 30 percen át keverjük, majd leszűrjük. A szűrőt ionmentes vizzel mossuk, ezután az egyesitett szürletet 10-szereg mennyiségű metanolhoz öntjük. A kivált csapadékos oldatot 5 °C-on állni hagyjuk, majd leszűrjük. A kiszűrt sziszomicin-szulfátot metanollal mossuk, majd vákuumban 50 °C-on foszforpentoxid felett szárítjuk. így 6,9 g sziszomicin-szulfátot kapunk, A termék fizikai jellemzői megegyeznek az 5. példában kapott termék jellemzőivel. 7. példa 5 g, a 4. példa szerint előállított sziszomicin-bázist 4o ml ionmentes vízben feloldunk, majd a kapott oldathoz keverés közben 4,42 g ammónium-szulfátot adunk. A reakcióelegyet 1 órán át keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot 20 ml ionmentes vízben oldjuk, majd a kapott oldathoz, 0,5 g aktiv szenet adunk. Az elegyet 30 percen át keverjük, majd leszűrjük. A szűrőt ionmentes vizzel mossuk, majd az egyesített szürletet 10-szereg mennyiségű metanolhoz öntjük. A kivált csapadékos oldatot 5 rC-on állni hagyjuk, majd leszűrjük. A kigzürt sziszomicin-szulfátot metanollal mossuk, majd vákuumban 50 °C-on foszforpentoxid felett száritjuk. így 6,8 g sziszomicin-szulfátot kapunk. A tennék fizikai jelleimsői megyeznek az 5» példában kapott termék jellemzőivel. 8. példa 15 g, a 4. példa szerint előállított sziszomioin-bázist 75 ml ionmentes vízben oldunk. Keverés közben kis részletekben 18,2 g frissen készült imidazol-szulfát sót adagolunk az oldathoz, Az Imidazol szulfát teljes oldódása után az oldat pH-ja 7,75. Az oldathoz 1,5 g aktiv szenet adunk és az elegyet 30 percen át keverjük, majd Seitz lapon szűrjük. A kiszűrt szenet 10 ml vizzel mossuk és a mosóvizet a szűrhettél egyesítjük. A mosóvízzel egyesitett szürletet keverés közben tízszeres menynyiségü metanolba csurgatjuk. További 30 perc keverés, majd 15 perc ülepités után a kivált sziszomicin-szulf átot dekántálva szűrjük. A kiszűrt anyagot ötször egymás után 100-100 ml metanollal felszuszpendálva mossuk, majd 100 ml acetonnal szuszpendáljuk, végül 50 mj acetonnal fedjük. 30 mbar nyomáson 4o C -on foszforpentoxid felett szárítjuk. 22 g 580 meg/mg aktivitású sziszomicin-szulfátot kapunk. A termék fizikai jellemzői megegyeznek az 5» példában kapott termék jellemzőivel. 9. példa Micromonospóra danubiensis /MN0 00171/ törzzsel előállított 10 liter térfogatú 380 ug/ml biológiai aktivitású fermentlé pH- ját 25 $-os ammónium-hidroxid oldattal keverés közben 9 »5-re állítjuk be, majd hozzáadagolunk 300 g aramónium-szulfátot. Ezt a lúgos fermentlét 30 percig keverjük, majd leszűrjük. A leszűrt 9
