179145. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására mikrobiológiai úton, micromonospora danubiensis-szel
179.145 micéliumot 3>5 liter vízzel mossuk, majd a kapott 11,5 liter egyesitett szürlethez addig adagolunk ammonium-oxalátot, símig a kálciumionok teljes leválasztását el nem érjük. Ezután még 15 percig keverjük a lúgos oldatot, majd 5 n. kénsavval a pH-ját 7-re állítjuk be. A kivált csapadékot leszűrjük, 500 ml vízzel mossuk. így 12 liter 250 wg/ml aktivitású szürletet kapunk. Ezt 150 ml, semlegesre mosott, ammónium-formájú Wofatit CP-300 ioncserélő gyantát tartalmazó oszlopon folyatjuk át 1000 ml/óra sebességgel. A megkötés befejeztével a gyantaágyat 500 ml ionmentes vízzel mossuk. A leoldást kOO ml 2 n ammónium-hidroxid oldattal végezzük, 200 ml/óra sebességgel. A sziszomicint tartalmazó frakciókat egyesitjük, és az igy kapott 180 ml oldatot vákuumban, 50-60 C° hőmérsékleten 20 ml térfogatra bepároljuk. Ezután az oldat pH-ját 5 n kénsav oldattal 7,5-re állítjuk be és 75 ral ammónium-formájú Amberlite CG-50-I gyantát tartalmazó oszlopra visszük fel. A gyantaoszlopot 500 ml ionmentes vízzel mossuk, majd 150 ml/óra sebességgel összesen 2100 ml 0,07» ammóniumhidroxid oldattal a kísérő szennyező bioszintézis termékeket leoldjuk. Ezután 450 ml 0,25 n. ammónium-hidroxid oldattal leoldjük a sziszomicint, ugyancsak 150 ml/óra sebességgel. A sziszgmicint tartalmazó frakciókat egyesitjük és vákuumban 50-60 C°-on bepároljuk. így 2,2 g sziszomicin-bázist tartalmazó oldatot kapunk. Az oldatot 0,3 S aktiv szénnel JO percig keverve derítjük, majd Seitz-lapon szűrjük. Ezután keverés közben kis részletekben 2,62 g frissen készült imidazol-szulfát sót adagolunk az oldathoz. Az imidazol-szulfát teljes oldódása után az oldat pH-ja 7,75. Az oldathoz 0,2 g aktiv szenet adunk és az elegyet 30 percen át keverjük, majd Seitz lapon szűrjük. A kiszűrt szenet 3-4 ml vízzel mossuk és a mosóvizet a szűrlettel egyesitjük. A mosóvízzel egyesitett szürletet keverés közben tízszeres mennyiségű metanolba csurgatjuk. További 30 perc keverés, majd 15 perc ülepités után a kivált sziszomicinszulfátot dekantálva szűrjük. A kiszűrt anyagot ötször egymás után 20-20 ml metanollal felszuszpendálva mossuk, majd 20 ml acetonnal szuszpendáljuk, végül 10 ml acetonnai fedjük. 30 mbar nyomáson 40 C°-on foszforpentoxid felett szárítjuk. így 3,2 g 580 mcg/mg aktivitású sziszomicin-szulfátot kapunk. A tennék fizikai jellemzői megegyeznek az 5. példa szerint kapott tennék jellemzőivel. A fentiekben leírtak szerint járunk el, azzal a különbséggel , hogy 2,65 g imidazol-szulfát helyett 1,13 S kónsavat, vagy 1,52 g ammónium-szulfátot vagy 2,95 S dipiridiniura-szulfátot alkalmazunk reagensként. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás sziszomicin antibiotikum és farraakológiailag elfogadható sóinak előállítására aerob fermentációval asszimilálható szén- és nitrogénforrást és ásványi sókat tartalmazó táptalajon és azt követő sóképzéssel azzal jellemezve, hogy Mioromonospora danubiens!s mikroorganizmus-faj valamely törzsét, előnyösen az MNG 00171 törzset, asszimilálható szén- és nitrogénforrást és ásványi sókat tartalmazó táptalajon aerób körülmények között tenyésztjük., majd kívánt esetben a keletkezett sziszórnioint a fermentlétől elkülönítjük, tisztítjuk és/ vagy kívánt esetben önmagában ismert módon farmakológiailag elfogadható sójává alakítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja 10
