179145. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sziszomicin előállítására mikrobiológiai úton, micromonospora danubiensis-szel
179.145 szójaliszt kukoricaliszt ka1oiumkarbonát kobaltklorid c aapviz 30.0 g 25.0 g 5,0 g 10.0 rag 1000 ml-re. A táptalaj pH-ja sterilezés után 7,0-7,2. A tenyésztés hőfoka 33 0°, a keverő fordulatszáma 220 fordulat/perc, a levegőztetés 2 m3/perc, a habzásgátló szójaolaj és pálraaolaj 30- 50 $-os elgye. Az antibiotikum termelés a fermentáció 26-30. órája között indul meg, s a maximális értéket a fermentáció 100. órájára éri el. Ekkor a fermentlé összes antibiotikum tartalma sziszomicin standardra vonatkoztatva 380 E/ml. A fermentáció befejezés után a fermentléből ismert módon eljárva tiszta sziszomicin bázist kapunk. A termék jellemzői: O.p. : 198-20 C°; /°C/n = + 188° /c = 0,3, viz/j IR-spektrum /Kör/: «(.OH, NH 3170-3360, <<CH=C0C I69O, KCOC IO6O cm“1. PMR-spektrum /DgO/: /l, 20 /Me-4" ,s, 3H/, <T 2,50/Me-N-3" , s , 3H/, cf 2 ,56 /H-3" , d, J2„ 3"=10 Hz, ÍH/,<r 3,17 /JI-6 * bs, 2H/ , cT 3,30/ Hax-5"’ d’ Jgem =12 Hz ’ m/' ** 3 >8o/ H-2" , dd, J2*,3«= 10 Hz, Hz, 1H/, <^,04 AHe-5» , d, í&em=12 Hz, III/, A ,88 /H-4’ ,bt, 1H/ ,(^5,09 /H-l" , d, >2„=4 Hz, 1H/ ,<^5,35 M-1’ , d,J1’2 »= 2 Hz> lH/PPm* Tömegspektrum: molekulasúly: 447 A jellemző ionok tömegszáma /m/e/: 447,332,304,l60,145, 127,118,110,100. 5. példa A 4. példa szerint előállított sziszomicin-bázis 15 g-ját 60 ml ionmentes vízben feloldjuk, majd a kapott oldathoz keverés közben annyi 5 n kénsav oldatot csepegtetünk, hogy az oldat pH-ja 4,3 legyen. Ezután az oldathoz 1,5 aktív szenet adunk és az elegyet 30 percen át keverjük, majd Seitz lapon leszűrjük, A szűrőt 3x5 ml ionmentes vízzel átmossuk, majd az egyesitett szürletet állandó keverés közben 1 liter metanolhoz öntjük. A kivált csapadékos oldatot hütőszobában állni hagyjuk, majd leszűrjük. A kiszűrt sziszomicin szulfátot 3x50 ml metanollal átmossuk, majd vákuraban, 50 C -on, foszforpentoxid fejlett súlyállandóságig szárítjuk. így 22 g sziszomioin szulfátot kapunk. /«G/§°= +10l( °/0 = l, víz/ Elemanalizis, °o talált metanolszolvátra számított c 33,02 33,14 H 6,31 6,35 N 9,36 9,66 so4 33,96 33,14 8
