179125. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a ß-nikotinamid-adenin-dinukleotid-kristályos lítiumsójának előállítására
179125 Elvileg az át kristályos itás magasabb /60 °C-ig terjedő/ hőmérsékletekre való melegítéssel és ezt követően szobahőmérsékletre történő lassú lehűtéssel is elvégezhető^ de ebben az esetben a tiszta termékre vonatkoztatott kitermelés - az anyagok nagy érzékenysége miatt - csökken. Ha a /^-NAD litiumsójának előállításánál nem indulhatunk ki a megfelelően lecsapott, porlasztással számított és/vagy liofilizált amorf A-NAD-Iítiumsóból, úgy a szabad sav vagy"valamely sója alakjában levő HAD szokásos módon könnyen átalakítható a 4-NA D-litiumsóvá. A szabad sav alakjában lévő HAD például litiumionokkal töltött ioncserélőn /Dowex 50, vagy I.R. 120 tipusu/ átvezetve, vagy a megfelelő jpH-értéknek hi§ litiunhidroxid-oldattal való óvatos beállításával alakítható át litiumsóvá. A HAD-sókat ugyanígy, például litiumiónokkal töltött ioncserélővel alakítjuk át a A—HAD-litiumsóvá. A találmány szerint előállított litiumsó nem rendelkezik az eddig elkülönített, ismert HAD-származékok hátrányaival; nem higroszkópos, ömleszthető, jól tárolható, továbbá a vegyi és enzimatikus analízisben 100 %-os /+-0,2%/ tartalmú, y^-HAD-ra vonatkoztatva. A litiumsó fehér és teljesen szagtalan. A szokványminőségű A-HAD szokványos főszennyeződései, különösen az c£-HAD és ADP-ribóz a találmány szerint előállított termékben éppen csak nyomokban mutathatók ki. A találmány szerinti eljárásnak az az előnye, hogy a Æ-HAD-litiumsó kitermelése közel kvantitatív. A találmány szerinti eljárással előállitott termék az enzimkinetikában a legjobb szokványminőségü HAD-készitményekkel összehasonlítva 10-20 á-kal magasabb értéket ad. Ezen túlmenően a találmány szerinti eljárás kevesebb műszaki ráfordítást igényel, mint a szilárd HAD-származékok elkülönítésére szolgáló ismert eljárások és igy gazdaságosabb. A találmányt a következő példák kapcsán ismertetjük közelebbről. 1. példa 10 ml H+-alaku Dowex 50 ioncserélőt 100 ml 2n litiumklorid-oldattal Li-alakuvá alakítunk és vizzel az eluátum klorid-mentességig mossuk. Ezután 1 g, szabad sav alakjában jelenlevő /^fc-HAD 50 ml vizzel készített oldatát az oszlopra visszük és utána addig mossuk, mig a képződött HAD-litium mennyiségileg az eluátumban van. Annak megállapítására, hogy HAD-litium kinyerhető-e még az oszlopból, 260 nm-nél extinkeió-mérést végzünk. Ezután a liofilizált /^—HAD-litiumsó 1 g mennyiségét 2 ml vízben oldjuk, az oldatot szobahőmérsékleten 3,7-es çH-értéken keverés közben cseppenként adagolt 1,2 ml acetonnal eppen még eltűnő zavarosodéiig elegyítjük és 20-25 °C-on kristályosítjuk. A kikristályosodott terméket 30 óra múlva leszivatjuk, kevés aceton-viz /1:2/ eleggyel kétszer mossuk és PpOj-felett vákuumban száritjuk. Kitermelés 900 mg /az alkalmazott liofilizált anyagra vonatkoztatva 90 %./ 2. példa 1 g liofilizált A-HAD-litiumsót 2 ml vízben oldunk és az oldatot szobahőmérsékleten 3»7 pH-értéken keverés^közben cseppenként adagolt 3»6 ml metanollal még éppen eltűnő zavarosodásig elegyítjük, majd az 1. példában ismertetettek szerint fel
