178495. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbonsavamid-származékok előállítására
7 178495 8 állatok fülvénájából a táblázatban feltűntetett vizsgálati időpontban 5-5 milliliter vért vettünk, és Gaubatz módszerével [Kiin. Wschrft., 14,1753—1755. (1935)] meghatároztuk a vérminták szilícium-tartalmát. A kapott eredményeket a II. táblázat tartalmazza. II. táblázat Csoport szám: I. H. ül. Napi dózis: 0 Mg 5 Mg 10pg A vér szilícium-tartalma milligramm/gramm Mintavétel időpontja: Ö óra 0,101+0,002 0,094 ± 0,006 0,101 ±0,005 5. nap 0,094 + 0,007 0,153 + 0,011 0,171 ±0,004 7. nap 0,115 + 0,016 0,150 + 0,002 0,172 ± 0,005 13. nap 0,116 + 0,009 0,181 ± 0,004x 0,200 ±0,013X 20. nap 0,124 + 0,010 0,300 + 0,013TM 0,364 ± 0,012XX 40. nap 0,148 + 0,010 0,329 ± 0,01 2m 0,354 ± 0,012xx A x jelentése p<0,01, a xx jelentése p< 0,001. Az eredmények a 13. naptól p<0,01, a 20. naptól pedig p< 0,001 szignifikanciát mutatnak. A plazma renin-koncentrációját befolyásoló hatás: A vizsgálatokat CFY patkánytörzsből származó, 25 10-10 állatból álló csoportokon végeztük. Az állatok a hatóanyagot intravénás beadással kapták a ül. táblázatban megadott dózisokban, majd a hatóanyag beadása után elvéreztettük őket aortán át. A nyert vérben Haas és munkatársai Dauda által módosított 30 módszerével határoztuk meg a plazma renin-koncentrációját. A kapott eredményeket a III. táblázat tartalmazza. III. táblázat Plazma Csoport Hatóanyag reninszáma dózis koncent-40 pgjlOO gramm ráció nanotestsúly gramm/mílliliter I. (kontroll) 0,00 41 ±7 45 11. 0,05 49 ± 8X m. 0,10 75 ± ÍO5“ IV. 1,00 60 ± 11** V. 10,00 59 ± 8^ 50 A x jelentése p < 0,05, a ^ pedig p < 0,001-et jelent. A találmány tárgyát képező eljárás részleteit a 55 továbbiakban kiviteli példákkal mutatjuk be. A kiviteli példák semmilyen szempontból sem korlátozzák a találmány teijedelmét. 1,083 gramm (2,2 mM) karbobenziloxi-L-glutaminsav-a-ben zil-y-(p-nitrofenilésztert) feloldunk 6 ml 2:1 arányú piridin-víz elegyben, hozzáadunk 65 282 mg (2 mM) kolaminfoszfátot [(ß-amino-etil)-dihidrogén-foszfát] (2 730 542 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás), majd 0,87 ml (6,2 mM) trietilamint. Az elegyet 72 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot vízben oldjuk, sósavval semlegesítjük és folyamatos extraktorban a p-nitrofenol eltávolítása céljából éterrel 8 órán át extraháljuk. A vizes fázist vákuumban bepároljuk. A termék 1,25 g karbobenziloxi-7-(a-benzil)-L-glutamil-kolaminfoszfát. 2. példa Az előző példában nyert tennék teljes mennyiségét (1,25 g) feloldjuk 10 ml 50%-os, vizes etanolban, hozzáadunk 0,3 g 10%-os palládium-csontszén katalizátort, majd a szuszpenzión 4 órán át hidrogén-gázt buborékoltatunk át. Ezután az oldatot szűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot 1-2 ml vízben oldjuk és a trietilamin eltávolítása céljából egy íT-ciklusban levő, 1x35 cm-es Dowex 50 x 2 oszlopra visszük fel, majd vízzel eluáljuk. 50 ml eluátumot gyűjtünk, melyet vákuumban bepárolunk. A termék 470 mg y-L-glutamfl-kolaminfoszfát (91%), amely azonban papírelektroforézises vizsgálatok tanúsága szerint szennyezésként mintegy 15-20% kolaminfoszfátot tartalmaz. Tisztítása többek között elektroforézis segítségével oldható meg. Az anyag pH 6,5-ös és 1,8-as papírelektroforéziskor egyaránt a katód felé vándorol. Ciszteinsavra vonatkoztatott relatív mozgékonysága pH 6,5-nél 0,75, pH 1,8-nál 0,36. Rf érték (n-butánol-piridin-jégecet-víz 15 :10 : : 3 : 12) = 0,18. 3. példa Karbobenziloxi-L-aszparaginsav-a-benzil-(3-(p- nitrofenilésztert) és kolaminfoszfátot reagáltatunk az 1. példában leírtakkal megegyező módon és karbobenziloxi-$-(a-benzil}-L-aszpartil-kolamin-foszfáthoz jutunk. 4
