178359. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a C-15003 jelű antibiotikum előállítására
5 178359 6 4. Fiziológiai jellemzők A törzs fiziológiai jellemzőit a 2. táblázatban foglaltuk össze. A növesztés során a hőmérséklet 12 és 38 °C között volt. Az a hőmérsékleti tartomány, amelyen belül agaron (ISP No. 2) jó aerob növekedés figyelhető meg 20—35 °C. 2. táblázat A C—15 003 számú törzs fiziológiai jellemzői Növekedésre alkalmas hőmérsékleti tartomány: 12-38 °C Aerob növekedésre alkalmas hőmérsékleti tartomány: 20-35 °C A zselatin megolvadása : pozitív A keményítő hidrolízise : pozitív Nitrátok redukálása: pozitív Tej peptonizálása: pozitív Tej koagulálása: negatív Kazein elbontása : pozitív Melanoid pigmentek termelése : negatív (pepton élesztő extraktum vas agar) pozitív (tirozin agar) Tirozin elbontása : pozitív Xantin élbontása : negatív Lizocimmel szembeni tolerancia: pozitív Nátriumkloriddal szembeni tolerancia : 2% 5. Különböző szénforrások felhasználása A különféle szénforrások felhasználását úgy vizsgáltuk, hogy egy Pridham és Gottlieb [Journal of Bacteriology 56, 107 (1948)] táptalajt és egy azonos összetételű alap táptalajt plusz 0,1% élesztő extraktumot használtunk. A kapott spektrumot a 3. táblázatban mutatjuk be. 3. táblázat Különféle szénforrások hasznosítása a C—15 003 törzs által Szénforrás Növekedés D-xilóz + + + * L-arabinóz D-glükóz + + + + D-galaktóz + + D-fruktóz + + + + + + L-ramnóz + + D-mannóz + + + + + szacharóz + + + + laktóz maltóz ± + trehalóz + + + raffinóz ± +* melibióz + + izo-inozitol _ _ D-szorbitol _ _ Alap táptalaj 0,1% élesztő extraktum adalékkal Szénforrás Növekedés D-mannitol + -(- + + glicerol — + oldható keményítő + + kontroll — — Megjegyzés : + + + : kiváló növekedés + + : jó növekedés + : növekedés + : rossz növekedés — : nincs növekedés 6. Egyéb jellemzők A sejteket a korábban, a 2. pont alatt leírt módszerrel gyűjtöttük össze és a DNA preparációját J-Marmur és mtsai [Journal of Molecular Biology 3, 208 (1961)] módszeréhez hasonló módon végeztük. A DNA (dezoxinukleinsav) G-C (guanin-citozin) tartalmát körülbelül 71 mól%-nak találtuk. A törzs vegetatív micéliumának Gram-vizsgálata pozitív eredményt adott. A C—15 003 törzs fenti jellemzőit összevetettük az S. A. Waksman „The Actinomycètes Vol. 2” [The Williams and Wilkins Co. (1961)] könyvében, valamint R. E. Buchanan és N. E. Gibbons „Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, 8. kiadás 1974” című kiadványával és más irodalmi adatokkal. Miután a törzset a Nocardia genus III. csoportjába tartozónak véltük, az a tény, hogy az ismert törzsek között nem találtunk olyat, amelynek a tulajdonságai azonosak lettek volna, arra a következtetésre kellett jutnunk, hogy az általunk vizsgált törzs egy új speciest képvisel. A C—15 003 számú törzset 3992 szám alatt letétbe helyeztük a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology mikroorganizmus gyűjteményében (FERM); míg a törzs a The Institute for Fermentation, Osaka (EFO) gyűjteményében az IFO 13 726 számot és a The American Type Culture Collection (ATCC), Maryland, USA gyűjteményében a 31 281 számot kapta. Míg a C—15 003 számú törzs a Nocardia genus egy új species-e, mint említettük, a többi mikroorganizmushoz hasonlóan hajlamos különböző változatok és mutánsok kialakítására akár spontán módon, akár mutagének hatására. így például a törzs sok variánsát kaphatjuk röntgensugarakkal végzett besugárzás hatására vagy gamma-sugarak, ultraibolya sugarak hatására, egysejtes izolálással, különböző vegyszereket tartalmazó táptalajokban végzett tenyésztéssel vagy bármely egyéb mutagén kezeléssel. A törzsből spontán módon keletkezett mutánsokat ugyancsak nem tekintjük külön species-nek, ellenkezőleg, bármely ilyen változat vagy mutáns, amely alkalmas a C—15 003 P—3, P—3' és/vagy P—4 mikroorganizmusok termelésére, felhasználható a találmány céljaira. így például a C—15 003 törzset különféle mutagogén kezeléseknek alávetve olyan mutánsokat kapunk, amelyeknél lényegében hiányzik az oldható pigment termelő képesség, amelyekben a micéliumok színtelenek, sárgászöldek, vöröses cserszínűek vagy narancsvörösek, más mutánsok gombasejtjei bacillusszerű elemekre vagy elágazó, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
