178084. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás natív vindolin katarantin 3,4,-anhidro-vinblastin, leurozin, és egyéb diindol alkaloidok kinyerésére vinca rosea l drogból
7 178084 8 megtörténte után 150-200 ml benzollal vindolmentesre mossuk. A benzolos szüredéket bepároljuk, a .bepárlási maradékot 5 ml éterben oldjuk, majd a kivált kristályokat szüljük, kétszer 1 ml éterrel mossuk, szárítjuk. Kitermelés: 0,8 g vindolin. Op.: 167-168 °C. [<*]d° = -28,5° (c = 1, kloroform). c) A II. anyalúghoz pH 5,5 érték eléréséig híg, vizes ammóniumhidroxid-oldatot adunk, majd 3—5-ször 1 liter benzollal extraháljuk. Az extrakció menetét vékonyrétegkromatográfiás módszerrel ellenőrizzük és az extrahálandó oldatot minden egyes benzolrészlet hozzáadása előtt pH 5,5-re állítjuk be. Az egyesített benzolos-extraktumokat bepároljuk, a bepárlási maradékot metanolból kristályosítjuk. A kristályokat szüljük, a metanolos anyalúgot továbbfeldolgozásra eltesszük. Kitermelés: 0,35 g 1 :1 arányú leurozin és 3’,4’-anhidro-vinblasztin keverék. d) Az 1. c) példa szerinti termék-keveréket 50 ml dimetilformamidban a levegő oxigénjével szobahőmérsékleten epoxidáljuk majd a reakcióelegy pH értékét 8,5-re állítjuk be. A leurozint a reakcióelegyből benzolba átoldjuk, az oldatot bepároljuk és a leurozint 3 ml metanolból kristályosítva kinyeijük. Kitermelés: 0,25 g leurozin, mely az 1 a) példában kapott 0,18 g ieurozinnal azonos minőségű. e) A leurozin és anhidro-vinblasztin kristályosításánál kapott metanolos anyalúgot [1. c) példa] bepároljuk. A bepárlási maradékot 12 ml benzolban oldjuk, majd a benzolos oldatot 100 g III. aktivitású alumíniumoxidból benzollal kialakított oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopról a katarantint benzollal eluáljuk. 50 ml-es eluátumfrakciókat fogunk fel. Az eluálás menetét vékonyrétegkromatográfiás módszerrel ellenőrizzük. A katarantin fő tömegét a 4. frakció tartalmazza. A katarantint tartalmazó eluátum frakciókat egyesítjük, majd szárazra pároljuk. A bepárlási maradékot 1,25%-os etanolos kénsavoldatban oldjuk (pH 4,5-5,0), majd egy éjjelen át kristályosodni hagyjuk. A kristályokat szűrjük, 1—2 ml etanollal mossuk, szárítjuk. Kitermelés: 0,41 katarantin-szulfát. [a]&° = 4- 58° (c = 1, 96% etanol). 2. példa Az 1. a) példa szerint 1 kg drogból előállított dimer alkaloid szulfátsó elegy szűrésénél kapott I. anyalúgot (kb. 100 ml) 1,5 liter vízzel hígítjuk, majd a pH értékét tömény-vizes-ammóniumhidroxid-oldattal 8,5-9-re állítjuk be. A lúgos oldatot négyszer 1 liter benzollal extraháljuk, majd az egyesített benzolos extraktumokat vízmentes nátriumszulfáttal vízmentesítjük, szűrjük, és a szűrletet bepároljuk. A bepárlási maradékot 55 ml benzolban oldjuk és az oldatot 450 g III-as aktivitású alumíniumoxidból és benzolból kialakított oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást 2 liter benzollal, majd 4,5 liter 3 :2 arányú benzol-kloroform eleggyel végezzük. 200 ml-es eluátum frakciókat fogunk fel és az egyes frakciók alkaloid tartalmát vékonyrétegkromatográfiás módszerrel azonosítjuk. Az első 4 frakció alkaloidmentes. Az 5—9-es frakció katarantint, a 21—26. frakció vindolint, a 27-28. frakció vindolint és 3’,4’-anhidro-vinblasztint, a 29—34. frakció pedig leurozint tartalmaz. Az azonos alkaloidot tartalmazó eluátum frakciókat egyesítjük és szárazra pároljuk. Kitermelés: 0,57 g katarantin, melyből 0,52 g katarantin szulfát nyerhető. (5-9. frakció) 0,145 g 3’4’-anhidro-vinblasztin (27—28. frakcióból, metanolból kristályosítva) Op.: 212-214 °C, [aß0 = + 64,2° (c = 0,5, kloroform) 0,125 g leurozin (29-34. frakcióból, metanolból kristályosítva) 0,78 g vindolin (a 3’4’-ahhidro-vinblasztin metanolos anyalúgjának és a 21—26. frakcióknak bepárlásával, majd éteres kristályosítással). 3. példa 0,145 g 3 ’^’-anhidro^vinblasztint 20 ml dimetilformamidban oldunk. Az oldaton lassú áramban 10 percig oxigént buborékoltatunk át, majd a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 16—20 órán át állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyhez 8,5 pH érték eltéréséig, tömény vizes ammóniumhidroxid oldatot adunk, majd a terméket háromszor 25 ml benzollal extraháljuk. Az egyesített benzolos kivonatokat vízmentes nátriumszulfáttal vízmentesítjük, szűrjük, majd a szűrletet bepároljuk. A bepárlási maradékot 1 ml metanolból kristályosítjuk. Kitermelés: 0,11 g (75%) leurozin. 4. példa Az 1. c) példa szerint előállított 3,5 g 1:1 arányú leurozin, 3’,4’-anhidro-vinblasztin keveréket 35 ml benzolban oldjuk, az oldatot 175 g III. aktivitású alumínium-oxidból és benzolból kialakított kromatográfiás oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopról a keverék komponenseit először 500 ml benzollal, majd 2,5 liter 3 :2 arányú benzol-kloroform elegygyel eluáljuk. 100 ml-es eluátum frakciókat fogunk fel. A benzolos eluátumok és a benzol-kloroformos eluátumok első 1 litere alkaloid mentes. Az ezt követő 1—7. frakciók a 3’,4’-anhidro-vinblasztint, a 8-15. frakciók leurozint tartalmaznak. Az azonos alkaloidot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és külön-külön bepároljuk. Kitermelés: 14 g 3’,4’-anhidro-vinblasztin és 12 g leurozin. 5. példa Az l.b) példa szerinti második anyalúghoz pH 5,5 érték eléréséig híg, vizes ammóniumhidroxid-oldatot adunk, majd háromszor, négyszer, vagy 5 10 15 20 2’5 30 35 40 45 50 55 60 65 4
