178052. lajstromszámú szabadalom • Fermentációs eljárás egy új antibiotikum, a tienamicin előállítására
11 178052 12 III. Táblázat Vizsgált organizmus Antibiotikus rezisztenciax Minimális gátlási koncentráció (MGK, mikrogram/mî) Staphylococcus aureus 2314 P 0,02 Escherichia coli 2482 0,3 Escherichia coli 2964 P, c 0,3 Escherichia coli 2017 0,15 Klebsiella 2921 P 0,3 Klebsiella 2922. P 0,3 Proteus mirabilis 2830 P, c 4,7 Serratia. 2840 p, C 4,7 Pseudomonas aeruginosa 2824 P, c 0,6 Pseudomonas aeruginosa 2616 P, c 4,7 Pseudomonas aeruginosa 3210 P, c 2,4 xp = penicillinek, amelyeket az ampiáUin képvisel. C = cefalosporinok, amelyeket a cephalotin képvisel. A tienamicin in vivo hatásos Gram-negatív és Gram-pozitív mikroorganizmusok ellen, és ezért alkalmas a gazda-állatok baktérium-fertőzésének a leküzdésére. Az in vivo hatás meghatározására a tienamicint feloldjuk és hígítjuk 0,15 mólos nátriumklorid-oldattal és 0,01’mólos nátriumfoszfát-oldattal, a pH—7,0, és ily módon öt sorozat vizsgálati antibiotikum-oldatot állítunk elő, ahol minden egyes sorozat az előbbi koncentrációjának az 1/4-e. Fehér, átlagosan 21 g-os nőstény svájci egereket intraperitoneálisan és szubkután fertőzünk a vizsgálati mikroorganizmussal, amelyet húslevesben szúszpendálunk. Az injektát organizmusok számát a lap-számláló módszerrel határozzuk meg. Bizonyos mennyiségű egeret a fertőzéskor, majd 6 órával ezután is intraperitoneálisan, szubkután és orálisan kezelünk az antibiotikummal. Minden egyes antibiotikum-koncentrációhoz 5 egeret alkalmazunk, 2 további egeret, amelyeket nem fertőztünk, ugyancsak kezelünk az antibiotikummal, annak megállapítására, hogy a beadagolt antibiotikum-mennyiség toxikus-e. Kontrollként a különböző hígítású fertőzőtenyészetekhez 5—5 egeret alkalmazunk, annak kiszámítására, hogy a fertőzött, kezeletlen állatok 50%-ára milyen számú organizmus letális (LD50). Ezt a számítást úgy végezzük, hogy megállapítjuk, hány egér marad életben a fertőzést követő hetedik napon. Ekkor kiszámítjuk azt az antibiotikum-mennyiséget is, amely megvédené a fertőzött egerek 50%-át (EDjo). Mindegyik állat, amely a fenti kezelést kapja és amelyet nem kezelünk antibiotikummal, elpusztul a fertőzést követő 48 órán belül. A IV. táblázat tartalmazza a 30.000 egység/mg-os tienamicin hatásosságát. IV. Táblázat Hatásossági vizsgálatok (egéren)“ Organizmus LD J0 Kezelési mód, adagok ED50 mg/kg adag Staphylococcus aureus 2949 7 i. p. X2 0,012 7 s. c. X2 0,08 13 p. o. X20 0,67 Pseudomonas aeruginosa 3210 7 i. p. X3« 0,45 7 s. c. X3 2,05 Escherichia coli 2017 9 i. p. X2 0,375 a = X3, azt a kezelést jelenti, amikor a kezelés a fertőző adag beadásakor, majd újból 2 órával és 4 órával ezután történik. X2, azt a kezelést jelenti, amikor a kezelés a fertőző adag beadásakor, majd újból 6 órával ezután történik. ß = a kísérleti állatokat a fertőzést és terápiát megelőzően 24 órát éheztetjük. Az emlősökre vonatkozó toxicitás alacsony és semmiféle káros hatás nem lépett fel 500 mg antibiotikum/egér testsúly kg intravénás adagolást követő 7 nap alatt. A tienamicin igen értékes antibiotikum különböző Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumokkal szemben, és ennek következtében gyógyszerként alkalmazhatjuk mind az ember-, mind az állatgyógyászatban. A találmány szerinti vegyületet felhasználhatjuk Gram-pozitív vagy Gram-negatív baktériumok okozta fertőzések kezelésére, például a Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseodomonas aeruginosa és Enterobacter cloacae ellen. A találmány szerinti baktérium-ellenes szert alkalmazhatjuk továbbá állati takarmány-adalékként, élelmiszerek .konzerválására, és dezinficiálására. így például alkalmazható vizes készítményekként, 0,1—100 rész antibiotikum/1.000.000 rész oldat koncentrációban a gyógyászati és fogászati berendezések káros baktériumainak az elpusztítására vagy növekedésük gátlására valamint iparilag hasznosítható baktericidekként, például vízfestményeken és papírgyári fehér papíron található káros baktériumok növekedésének a gátlására. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
