178052. lajstromszámú szabadalom • Fermentációs eljárás egy új antibiotikum, a tienamicin előállítására
9 178052 10 becsülhető, hogy a visszanyert taurin aránya 0,8 millimól vdt minden egyes tienamicinra, amely e reakcióban résztvett. A tienanüdn stabilitása vizes oldatban optimális ha a koncentrációt 1 mg/nú alatt tartjuk és foszfát-puffert adagolunk, a pH 6—7 között tartására. Például az 1 mg/ml-es vizes oldatnak (pH = 7,0), 0 °C-on tárolva, a felezési ideje 20 nap, míg az azonos koncentrációjú, 10 millimól kálium-foszfátot tartalmazó oldat (pH = 7,0) felezési ideje megnő 371 napra. Ha azonban egy 12 mg/ml-es antibiotikum-oldatot — 10 millimól foszfát-pufferben — 10 °C-on tárolunk, úgy felezési ideje lecsökken 3 napra. Ez az oldat először halvány sárga, majd a 48. tárolási óra után mély ámbra-színűvé válik. 15 A tienamicin felezési ideje a semlegességi pH alatti értéken és szobahőmérsékleten a következő 346 perc, pH = 4,0-en, 30 perc, pH = 3,0-án, 6,7 perc, pH = 2,0-án, aholis minden esetben 30 millimól foszfát-puffért alkalmazunk a hidrogén-ion20 szabályozására. A semlegességi pH fölötti értéken és 30 °C-on a felezési idők a következők: 10 perc, pH = 8,2-őn, 5,7 perc, pH = 8,8-on (borát-puffer), 2,1 perc, pH = 12-ön (0,01 mólos nátrium-hidroxid-oldat). Az antibiotikus hatás és a 296,5 nm-n mért ultraibolya abszorpció egyszerre szűnik meg, és a reakcióelegy, amely eredetileg 0,05 mikronról antibiotikumot és 4 mikronról hidroxilamint tartalmazott ml-enként, és inkubálása pH = 7,0-án és 20 °C-on történt, felezési ideje 5,7 perc. 2,5 perces felezési időt észlelünk, ha 4 mikromól/ml cisztein a reagens, a pH = 7,0 és a hőmérséklet 20 °C. Végül megszűnik az antibiotikus hatás és az abszorpció, ha az antibiotikumot 0-laktamáz-készítmény hatásának tesszük ki, amelyet Enterobacter doaceae törzs ultrahanggal végzett szétbomlásával nyerünk. A tienamicin szerkezete feltehetőleg az I képletnek felel meg. A tienamicint továbbá a következő antibiotikus spektrum profil jellemzi. A vizsgálat a Bauer-Kirby•féle lemez-diffúziós módszer szerint történik, azzal a csekély változtatással, hogy ez esetben 2 mm agar-mélységet alkalmazunk. Az eredményeket a II. táblázat foglalja össze, a gátlási zóna átmérőjének mm-ében mérve. 25 II. Táblázat Organizmus Antibiotikus rezisztenciax Staphylococcus' aureus 2985 -Staphylococcus aureus 2314 P Streptococcus faecalis 755 -Bacillus subtüis 964 -Escherichia coli 2017 -Escherichia coli 2964 P, C Escherichia coli 2482 -Klebsiella 2921 P Klebsiella 2922 P Enterobacter cloaceae 2646 P, C Enterobacter cloaceae 2647 — Proteus mirabilis 2830 P, C Proteus morganii 2833 P, C Serratia 2840 P, C Pseudomonas aeruginosa 2824 P, C Pseudomonas aeruginosa 3210 P, C Pseudomonas aeruginosa 2616 P, C xp = penicillinek, amelyeket az ampicillin képvisel C = cefalosporinok, amelyeket a cephalotin 55 képvisel. xxi = nyers készítmény (310 egység/mg). II = közbenső tisztaság 13.200 egység/mg). Dl = tiszta termék (31.000 egység/mg-ra becsülve). 60 A baktérium-ellenes hatás egységét a következő fejezetben, a „Kísérletek” című fejezetben definiáljuk. xxx = Az alábbiakban leírt 65 Antibiotikus készítményt I II III mikrogramm antibiotikum/lemez*** 12 9,7 6,6 39 39 38 40 39 38 27,5 26 24 48,5 48 46 30 29 28 28 27 27 30 28 27 26 25 25 26 25 25 26 26 25 30 30 27,5 23 22 21 23,5 22 20 25 24 23 31 32 30 27 27 25 23 22 20,5 hidroxilamin-kioltási abszorpció alapján számolva. A tiszta antibiotikum további hatás-eredményeit az úgynevezett agar hígítási módszerrel kapjuk. 2 x 10 4 -1 xlO* mikroorganizmus-oltóanyagot, 0,002 ml-es csepp alakjában juttatunk a Müller-Hinton-féle agar felületére, amely agar kétszeres hígításé, 0,01-73 mikrogramm/ml antibiotikum-sorozatot tartalmaz. Az eredményeket a III. táblázat foglalja össze, minimális gátlási koncentrációban, mikrogramm/ml-ben megadva, amely a legkisebb antibiotikus koncentráció, amelynél a vizsgált mikroorganizmus 37 °C-on 18 órán át gátolt. 5
