177586. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás stabilis d-vitamin ciklodextrin zárcány-komplexek előállítására
9 177586 10 méket 2900 lux fényerőnél 4—600 nm-es hullámhossz tartományban 320 órán keresztül 1 mm vastag rétegben Petri-csészében kiterítve besugározzuk. A különböző időpontokban vett mintákban a D3-vitamintartalmat kevés dimetilformamidban történő oldás és 96%-os etanollal történő hígítás után UV spektrofotometriával meghatározzuk; az eredményeket a következő táblázat tartalmazza. Mint látható a legstabilisabbnak a találmány szerinti eljárással készült termék bizonyul. A fényterhelés hatása a D3-vitaminra (az eredeti hatóanyagtartalom százalékában) idő órában 6,7% D3-vitamin és 92,3% /?-ciklodextrin keveréke 7,1% D3-vitamin tartalmú komplex a 76, 128, 417 számú japán nyilvánosságrahozatali irat szerint előállított a jelen találmány szerint előállított D,-vitamin-j?-ciklodextrin komplex, 6,9% Ds-vitanain tartalommal 0 100,0 100,0 100,0 32 80,6 101,0 101,6 48 82,1 97,2 101,6 64 76,0 92,1 96,7 96 52,2 88,7 98,3 112 58,3 87,1 95,1 160 47,1 87,1 95,1 320 45,5 82,6 95,1 Minerálstabilitási vizsgálatok: Azt vizsgáljuk, hogy rézsók miként befolyásolják a D3-vitamin bomlását a ß-ciklodextrinnel alkotott keverék formájában, illetőleg a ß-ciklodextrin zárványkomplex formájában. A 7% D3-vitamint tartalmazó keveréket, illetve az 1. példa szerint előállított ciklodextrin zárványkomplexet 1: 1 arányban összekeverjük finoman elporított kristályos rézszulfáttal és egy mozsárban alaposan eldörzsöljük. A mintákat szobahőmérsékleten szabad levegőn tároljuk és havonta egyszer meghatározzuk a D3-vitamin tartalmat. Mint az alábbi táblázatban látható, a zárványkomplex képzés nagymértékben képes stabilizálni a D3-vitamint a rézsóknak a D3-vitamín bomlását katalizáló hatásával szemben. idő hónapokban D,-vitamin és ciklodextrin keveréke + rézszulfát Dj-vítamín-jS-ciklodextrin zárványkomplex 4- rézszulfát A még meglévő D3-vitamin az eredetileg bemért mennyiség százalékában 0 100,0 100,0 í 61,2 90,6 2 45,2 83,5 3 38,7 82,1 4 29,2 78,6 5 22,1 77,2 A D3-vitamin ß-ciklodextrin zárványkomplex biológiai hatékonyságának vizsgálata Rachitises patkányokon bizonyltjuk egy kísérletsorozatban azt, hogy a zárványkompíex hatékonysága legalább olyan jó, vagy még jobb mint az azonos dózisú D3-vitaminé: egy másik kísérletsorozatban hipervitaminózis előidézésével bizonyítjuk azt, hogy zárványkomplexből jobb hatásfokkal történik meg a D3-vitamin felszívódása mint a szabad D3-vitaminból; egy harmadik kísérletsorozattal pedig azt bizonyítjuk, hogy a hőkezeléssel szemben a zárványkomplexben levő D3-vitamin biológiai hatását megőrzi, míg a szabadállapotú D3-vitamint a kémiai vizsgálatokkal összhangban hőterhelés hatására jelentős mértékben elveszíti biológiai aktivitását is. 50 g átlagsúlyü nőstény patkányokat 36 napig tartunk rachitogen diétán, melynek összetétele az alábbi : búzaliszt 33%, kukoricaliszt 33%, búza sikér (glutén) 15%, zselatin 15%, kalciumkarbonát 3%, nátriumklorid 1%. Az ilyen diétán tartott patkányok 36 nap elteltével a normál patkánytápon tartott kontroll állatokhoz viszonyítva súlygyarapodásukban nagymértékű visszamaradást mutatnak (lásd a következő táblázatban), a szőrzetük durva lett, amit az állatok nem tisztogattak, és a vér foszfát-, illetve kalciumszintjében is jelentős változás következett be. Az első kísérletsorozatban a rachitises patkányokat (36 napos racitogen diétán történő tartás után) az első két napon 5 nemzetközi egység, majd azután 23 napon keresztül napi 10 nemzetközi egység D3-vitaminnal kezeljük, az egyik csoportot a standard D3-vitaminnal, a másik csoportot pedig az 1. példa szerint előállított D3-vitamin- ß-ciklodextrin zárványkomplexszel. Testsúlyadatok: Az első 2 hétben a D3-vitamin és a zárványkomplex hatása közel azonos, a későbbiekben a zárványkomplex hatása valamivel nagyobb. Vérszérum anorganikus foszfáttartalma: a D3-vitaminnal kezelt csoport szérum foszfáttartalma 25 nap alatt sem éri el a kontroll állatok szérum foszfáttartalmát, míg a zárványkomplexszel kezelt állatoké 1 hét alatt eléri a normál szintet. A szabad D3-vitaminnal kezelt csoport szérum anorganikus foszfátszintje a 18. napon is csak a 75%-a a kontroll állatok szérumfoszfát szintjének. A csontokba beépülő szervetlen foszfáttartalom vizsgálata is azt bizonyítja, hogy a zárványkomplex hatására gyorsabb a foszfátbeépülés. A D3-vitaminnal kezelt állatok szérum kalciumszintje a kontroll állatokénak mintegy a 90%-a, míg a zárványkomplexszel kezelt állatok szérum Ca-szintje a kezelés megkezdése után 1 héttel a kontroll állatok szintjét már eléri. A csontok morfológiai vizsgálata: 50 napos rachitogen diéta után a tibia epiphysisénak a bunkószerű megvastagodása jól látható, a csontoso5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
