177586. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás stabilis d-vitamin ciklodextrin zárcány-komplexek előállítására
11 177586 12 dási zóna széles, porcos, az epiphysis elülső és hátulsó felszíne is erősen kiszélesedő porcból áll. A Bilis-skála szerint 0,5-es fokozatba, azaz „igen súlyos elváltozás” illeszthetők be ezek a csontok. A kezelés 7. napján a D3-vitaminnal kezelt állatoknál változás még nem tapasztalható, míg a zárványkomplexszel kezelt állatoknál már javul a helyzet és az 1,75—2,0 fokozatba „közepesen súlyos” sorolhatók be az állatok. Itt megkezdődik a porc kettéválása és keskenyedik a porcos zóna. 22 napos kezelés után a D3-vitaminnal kezelt állatoknál még csak minimális elváltozás figyelhető meg, míg a ciklodextrin zárványkomplexszel kezelt állatok tibia-ján az epiphysis hátsó bunkója eltűnik, és a porcos zóna jelentős mértékben elvékonyodik. A 25. napon a D3-vitaminnal kezelt állatoknál is vékony a porcos zóna, azonban a felső csontgerendázat még nem ép. A ciklodextrin zárványkomplexszel kezelt állatoknál már viszonylag jólfejlett gerendázat figyelhető meg. Mindkét csoport már csak az „enyhén rachitikus” tüneteket mutatja, a D3-vitaminnal kezeltek a 2,5-es a komplexszel kezeltek pedig a 3,0-s skála értékkel jellemezhetők. A zárványkomplex hatása mintegy 2 hetes előnyt jelent a rachitises állapot gyógyulásában. Egy másik kísérletsorozatban hypervitaminózis kiváltásával igazoljuk azt, hogy a zárványkomplexből jobb hatásfokkal történik meg a D3-vitamin felszívódása mint a szabadállapotú vitaminból. Az irodalom szerint 200 nemzetközi egység az a dózis, amely maradandó nephrocalcinosist idéz elő, tehát toxikus. 36 napon át rachitogen diétán tartott patkányokat 100 nemzetközi egység D3-vitaminnal, ill. ß-ciklodextrin zárványkomplexbe zárt D3-vitaminnal kezelünk. A D3-vitaminnal történő kezelés hatására az állatok mozgása dinamikussá válik, durva szőrzetük normalizálódik. Testsúlyuk a táblázatban látható értékek szerint rohamosan közelíti a kontroll állatok testsúly értékét. A D3-vitamin 8-ciklodextrin zárványkomplexszel kezelt állatok 4 napi kezelés után valamennyien elpusztultak. A boncolás megállapította hogy az állatokban nagyfokú epeszekreció, puffadt belek voltak megfigyelhetők, a vese kéregállomány világos színű, pozitív benzidin reakcióval bizonyíthatóan haemoglobinuriás. Ezt a kísérletet megismételjük 150 g súlyú nem rachitises intakt patkányokkal, az eredmény ugyanaz. A D3-vitamin 100 nemzetközi egység/nap adagban nem eredményez hypervitaminózist, de a ß-ciklodextrin zárványkomplex ezt minden esetben kiváltja. Ezzel tekintjük bizonyítottnak azt, hogy a zárványkomplexből a vitamin felszívódása jobb hatásfokkal történik, mint a szabad állapotú vitaminból. Egy harmadik kísérletsorozatban a standard D3-vitamin, a 48 óráig 60 °C-on tartott standard D3-vitamin és a 48 óráig 60 °C-on tartott D3-vitamin- ß-ciklodextrin zárványkomplex biológiai hatását hasonlítjuk össze. Az előzőekben említett 36 napon át rachitogen diétán tartott 50 g súlyú nőstény patkányokat kezelünk olyan dózisokkal, amelyekben az eredeti (hőkezelés előtti) D3-vitamin-tartalom 100 nemzetközi egységnek felelt meg naponta. A legnagyobb súlygyarapodást a hővel kezelt D3-vitamin-ciklodextrin zárványkomplexszel lehet elérni; az állatok súlygyarapodása már 12 nap alatt szorosan megközelíti a kontroll állatok testsúlyértékeit. Ennél kisebb, de ugyancsak jelentős gyarapodást lehet megfigyelni a standard D3-vitaminnal kezelt állatoknál, és lényegesen kisebb testsúlygyarapodást mutatnak azok az állatok, amelyek a hővel kezelt D3-vitamint kapják. A 36 napig rachitogen diétán tartott patkányokban a szérumfoszfát koncentráció több mint egy nagyságrenddel csökken a kontroll állatokhoz viszonyítva. A zárványkomplexszel kezelt állatokban 3 nap után a szérumfoszfát szint eléri, sőt némileg meghaladja a kontroll állatok szérumfoszfátszintjét. Ez azt bizonyítja, hogy a zárványkomplexben stabilizált vitamin a hőkezelés dacára is megőrzi hatékonyságát. A hővel kezelt D3-vitamin hatása sokkal kisebb. A hőkezelt D3-vitámin zárványkomplex hatékonysága a szérum alkalikus foszfatáz, és a szérum kalciumszint vizsgálata szerint is jobb mint magáé a standard D3-vitaminé és sokkal jobb mint a hővel kezelt D3-vitaminé. A kontroll patkányok és a rachitogen diétán tartott állatok testsúlygyarapodása az idő függvényében idő napokban Kontroll Dj-vitamin HÔkezeït Ds-vitamin Hőkezelt Dj-vitamin /S-ciklodextrin zárványkomplex A pa kányok si ilya g-ban i. 51 g 51g 51g 51g 12. 80 g 57 g 50 g 55 g 24. 103 g 60 g 61 g 61g 36. 116 g 69 g 68 g 71 g A vitaminkezelés kezdete 42. 136 g 79 g 83 g 95 g 48. 203 g 140 g 105 g 198 g Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás D-vitaminok ß-ciklodextrinnel képezett stabilis zárványkomplexeinek a komponensek oldatban történő érintkeztetésével való előállítására, azzal jellemezve, hogy a ß-ciklodextrint és a D-vitamint 60— 65 térfogatszázalék etanolt tartalmazó, 50—75 °C hőmérsékletű, homogén vizes oldatban reagáltatjuk egymással keverés közben, majd az elegyet 10—25 C°-ra hűtjük és előnyösen liofilezéssel vagy szűréssel elkülönítjük a zárványkomplexet. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja D3-vitamin ß-ciklodextrinnel képezett zárványkomplexének előállítására, azzal jellemezve, hogy D-vitaminként D3-vitamint alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a 25-hidroxikolekalciferol ß-ciklodextrinnel képezett zárványkomplexének előállítására, azzal jellemezve, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
