177561. lajstromszámú szabadalom • Eljárás poliamidhoz kötött, biológiailag aktív protein előállítására
7 177561 8 tül áramoltatjuk. Ezután a csövet vízzel mossuk, metakrilamid-metakrilsav-hidroxiszukcinimidészter kopolimer oldatát töltjük a csőbe, 4 óra múlva a csövet kiürítjük, és vízzel mossuk. Ezt követően 2 mg/ml koncentrációjú glukózoxidáz 0,1 mólos, 7,8 pH-jú foszfátpuffert töltünk belé, éjszakán át 4 Cc-on hagyjuk állni, kiürítjük, és mossuk. A kész enzimcső 1,5 U/m aktivitást mutat. 7. példa 20—20 g nylon-6 részecskét 0,3 mól feniléndiaminnal és 0,1 mól trioxánnal 60%-os ecetsavoldatban 50 C°-on, illetve 0,3 mól diaminodifenilmetánnal és 0,1 mól trioxánnal 60%-os ecetsavoldattal 50 C-on 2 órán át reagáltatunk. Vizes mosás után a feniléndiamin-termék és a diaminodifenilmetán-termék felét 1:10 arányban hígított híg sósavban szuszpendáljuk, 0 C°-ra hűtjük, és keverés közben 0 C-on 2,5 mólos nátriumnitrit-oldattal diazotáljuk. 60 perc múlva jéggel hűtött vízzel mossuk. 1—1 g diazotált feníldíamín-származékhoz 10 mg/'mí koncentrációjú, 0,1 mólos, 7,0 pH-jú foszfátpufferral készült glukózoxidáz-oldatot adunk, és 4 C°-on éjszakán át állni hagyjuk. 0,1 mólos, 7,0 pH-jú, 1 mólos konyhasó tartalmú foszfátpufferral végzett mosás után a feniléndiamin-származék esetében 17 U/g, a diaminodifenilmetán-származék esetében 71 U/g aktivitást mérünk. A frissen diazotált feniléndiamin-származék és diaminodifenilmetán-származék 1—1 g-jához 5 mg/ml koncentrációjú, 6,0 pH-jú 0,1 mólos foszfátpufferral készült koleszterin-oxidáz oldatot adunk, 4 C°-on éjszakán át állni hagyjuk, majd konyhasóra 1 mólos, 6,0 pH-jú 0,1 mólos foszfátpufferral mossuk. A diazotált feniléndiamin-származék esetében az aktivitás 155 U/g, a diazotált diaminodifenilmetán-származék esetében pedig 160 U/g. Ezután mindkét terméket még egyszer mossuk konyhasóra 1 mólos és Thesit-re (hidroxipolietoxidodekán) 0,5%-os, 6,0 pH-jú 0,1 mólos foszfátpufferral. Ezután a mosási művelet után a feniléndiamin-származék aktivitása 10 U/g-ra, a diaminodifenilmetán-származék aktivitása pedig 15 U/g-ra csökken. 8. példa 5—5 g nylon részecskét az egyik esetében 0,3 mól diaminodifenilmetánnal és 0,1 mól trioxánnal, a másik esetben 0,3 mól karbamiddal és 0,1 mól trioxánnal, a harmadik esetben 0,3 mól anilinnal és 0,1 mól trioxánnal, a negyedik esetben 0.3 mól triaminotriazinnal és 0,1 mól trioxánnal 50%-os hangyasavoldatban 3 órán át 20 C°-on reagáltatunk. A mosás után a különböző származékokat 0,2 mólos, 8,5 pH-jú borátpufferral készült 10%-os glutáraldehidoldattal 15 percig reagáltatjuk, majd még egyszer mossuk. A különböző származékok 1—1 g-jához ezután 40,5 ml 0,1 mólos, 8,3 pH-jú trietanolamin puflferral 480 mg veseacilázból készített oldat 3 ml-ét adjuk. 1 órán át reagáltatjuk, majd feszüljük, és mossuk. A mért aktivitás a feniléndiamin-származék esetében 7,5 U/g, a diaminodifenilmetán-származék esetében 6,7 U/g, a karbamid-származék esetében 6,8 U/g, és a triaminotriazin esetében 8,9 U/g. 9. példa 10 g nylon-6 részecskéket 2 g zselatin és 0,1 mól trioxán 50%-os hangyasavval készült oldatával 3 órán át 50 C°-on reagáltatunk. Ezután mossuk, és a nylon-származékhoz 0,2 mólos, 8,5 pH-jú borátpufferral készült 10%-os glutárdialdehid oldatot adunk. 15 perc múlva leszűrjük, újra mossuk, és a származékhoz 5 mg/ml koncentrációjú, 0,1 mólos, 7,8 pH-jú foszfátpufferral készült glukózoxidáz oldatot adunk. Éjszakán át 4 C“-on történt állás után leszűrjük és mossuk. A nylonzselatin-származékhoz kötött glukózoxidáz aktivitása 81 U/g. 10. példa 0,1 mól poliamid-6-ot 100 %-os hangyasavban oldunk, és 0,1 mól feniléndiamint és 0,033 mól trioxánt adunk hozzá. 3 órás, 50 C°-on végzett reakció után az oldatot vízzel kicsapjuk, majd a kicsapott nylon-származékhoz alkoholos és vizes mosás után 0,2 mólos, 8,5 pH-jú borátpufferral készült 10%-os glutáraldehid oldatot adunk, majd 15 perc múlva újra mossuk. Ezután a nylon-származékhoz 2 mg/ml koncentrációjú, 0,1 mólos, 7,8 pH-jú foszfátpufferral készült glukózoxidáz oldatot adunk, éjszakán át 4 C°-on állni hagyjuk, majd ezután mossuk. A mosott nylon-származék 16 U/g aktivitást mutat. 11. példa A 10. kiviteli példában leírt módon nylon-származékot állítunk elő, de nem vízzel csapjuk ki azt, hanem 0,315—0,400 mm átmérőjű agyagrészecskéket adunk hozzá úgy, hogy még diszkrét részecskék vannak jelen, majd az anyagot vákuum alá helyezzük. Vizes mosás után 0,2 mólos, 8,5 pH-jú borátpufferral készült 10%-os glutáraldehid-oldatot adunk hozzá, 15 perc múlva szűrjük, mossuk, és a bevonattal ellátott agyaghoz 0,1 mólos, 7,8 pH-jú foszfátpufferral készült 2 mg/ml koncentrációjú glukózoxidáz oldatot adunk hozzá. Éjszakán át 4 C°-on állni hagyjuk, leszűrjük és mossuk. A nylon-agyag származék glukózoxidáz-aktivitása 8 U/g. 12. példa Nylon-származékot állítunk elő a 10. kiviteli példában leírt módon, és azt előzőleg benzollal ragacsossá tett, 3 cm magas és 1 cm átmérőjű polisztirol üvegecskékbe töltjük. Egy órás állási idő után a nylon-származékot kiöntjük, az üvegecskéket átöblítjük, majd 0,2 mólos, 8,5 pH-jú pufferral készült glutárdialdehid oldattal töltjük meg azokat. Éjszakán át 4 Cc-on történt állás után az üvegecskék mosás után 0,5 U/üveg aktivitást mutatnak. 13. példa 18,6 g CaClj, 18,6 g víz, 63 g metanol és 1—1000 rész hangyasav elegyében 30—80 Cc közötti hőmérsékleten poliamid-6-ot oldunk, az oldatot forrón 2 m hosszú csövekbe töltjük, majd ezután azokat azonnal kiöblítjük hideg vízzel. A csövek belső felületén amorf, reakcióképes nylonréteg marad vissza. Ezután 0,03 mól feniléndiamin és 0,01 mól trioxán 60%-os ecetsavval készült oldatát szivattyúzzuk át 60 Cc-on a nyloncsöveken. Ezután vízzel mossuk, majd 50 mg/ml koncentrációjú dioxános parafasav-dihidroxiszukdnimidészter oldatot töltünk a csőbe. 15 óra múlva a csövet kiürítjük, és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
