177515. lajstromszámú szabadalom • Eljárás TRH-analógok előállítására
13 177515 14 datot fagyasztva szárítjuk. 2,60 g (60,5%) terméket kapunk; [afe1 = -61,9° (c = 0,49, vízben): Rf = 0,35 [az 1. példa (c) lépésénél megadott körülmények között]. Elemzés a C16H2105N5SHCl-2,5 H20 képlet alapján: számított: C: 40,29%, H: 5,72%, N: 14,68%, S: 6,23%; talált: C: 40,28%, H: 5,09%, N: 14,65%, S: 6,19%. (c) lépés: Oct-His-Pro-NHCH2CH2CH2CH,CH3 előállítása 432 mg (0,001 mól) Oct-His-Pro-OH, 269 mg (0,0015 mól) HONB és 0,29 ml (0,0025 mól) n-amilamin dimetilformamiddal készített oldatához 620 mg (0,003 mól) DCC-t adunk, és a reakcióelegyet 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált karbamidot leszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, és a kapott porszerű anyagot a 3. példa (c) lépésében leírt módon tisztítjuk. 110 mg terméket kapunk acetátsó formájában; [a]21 = —65,4° (c = 0,35, vízben); Rf = 0,73 [az 1. példa (cf lépésében megadott körülmények között]. Elemzés a C2|H3204N6S CH - C00H-2 H20 képlet alapján : számított: C: 49,27%, H: 7,19%, N: 14,99%, S: 5,72%; talált: C: 48,83%, H: 6,56%, N: 15,36%, S: 5,57%. 12. példa Az alábbiakban felsorolásra kerülő vegyületeket a 11. példa (c) lépésében leírt módon állítjuk elő a megfelelő aminokból kiindulva. Oct-His-Pro-NHCH2CH3—acetátsó: Hozam: 137 mg; [aß = — 67,7° (c = 0,31, vízben); Rf = 0,55 [az 1. példa (c) lépésében megadott körülmények között]. Elemzés a C|8H2604N6SCH3C00HH20 képlet alapján: számított: C: 47,99%, H: 6,44%, N. 16,79%, S: 6,41%; talált: C: 47,74%, H: 6.43%, N: 16,74%, S: 6,15%. Oct-His-Pro-NH-CH2CH2CH3—acetátsó : Hozam: 90 mg; [a]„ = — 51,6 (c = 0,31, vízben); Rf = 0,65 [az 1. példa (c) lépésében megadott körülmények között] Elemzés a C|9H2804N6SCH3C00H-2 H20 képlet alapján : számított: C: 47,36%, H: 6,81%, N: 15,78%, S: 6.02%; talált: C: 47,29%, H: 6,13%, N: 15,49%. S: 6,02%. Oct-His-Pro-NHCH2CH,CH2CH2CH2CH, -acetátsó: Hozam: 105 mg; Mn = — 66,4' (c = 0.54, vízben); Rf = 0.70 [az. 1. példa (c) lépésénél ismertetett körülmények között]. Elemzés a C22H3404N^ CH3C00H-2 H20 képlet alapján: számított: C: 50,16%, H: 7,36%, N: 14,62%, S: 5,58%; talált: C: 49,76%, H: 7,18%, N: 15,78%, S: 5,66%. 13. példa (a) lépés: BOC-His(Tos)-Tac-NH2 előállítása 50 ml DMF-ban 1,3 g (0,01 mól) metatiazolidin-5-karbonsavat szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz 1,4 ml trietilamint adunk. A reakcióelegyhez ezután hozzáadjuk 5,9 g (0,01 mól) BOC-His(Tos)-OH-DCHA sóból a DCC- módszerrel előállított BOC-His(Tos)-OSU DMF-os oldatát, majd a reakcióelegyet 48 órán át szobahőmérsékleten keveijük. Ezt követően 5 ml jégecetet adagolunk, ezután pedig csökkentett nyomáson a DMF-ot ledesztilláljuk. A maradékot 200 ml etilacetátban oldjuk, majd a kapott oldatot 100—100 ml vízzel kétszer mossuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk, szűrjük és az etilacetátot ledesztilláljuk. Az ekkor kapott maradékot feloldjuk 20 ml kloroformban, majd az így kapott oldatot felvisszük 3,0-15,0 cm méretű, szilikagéllel töltött oszlopra. Az oszlopot először 200 ml kloroformmal mossuk, majd 300 ml 95:5 arányú kloroform : metanol eleggyel eluáljuk. A 120. és 270. ml közötti, termékben dús frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 30 ml dietiléterből átkristályosítjuk. így 1,65 g (31, 5%) mennyiségben a lépés címadó vegyületét kapjuk, amelynek olvadáspontja 68—70 C°; [a]2] = —37,0" (c = 0,6, dimetilformamidban); Rf=0,50 9:1:0,5 arányú kloroform:metanol:ecetsav eleggyel mint futtatószerrel. Elemzés a C„H280 7N4S2 képlet alapján: számított: S: 12,22%; talált: S: 10,36%. (b) lépés: Cbl-His(Tos)-Tac-OH előállítása 1,57g (0,003 mól) BOC-His(Tos)-Tac-NH, és 30 ml trifluorecetsav keverékét 10 C°-on tartjuk 20 percen át, majd csökkentett nyomáson a trifluorecetsavat ledesztilláljuk és a maradékhoz 100 ml dietilétert adunk. A képződött csapadékot ezután kiszűrjük, majd nátriumhidroxid fölött szárítjuk és 50 ml dimetilformamidban feloldjuk. Az így kapott oldathoz jeges hűtés közben 0,42 ml (0,003 mól) trietilamint és 1,14 g (0,003 mól) Cbl-pentaklórfenolésztert adunk, majd az így kapott reakcióelegyet 24 órán át keverjük. Ezt követően a dimetilformamidot vákuumban ledesztilláljuk, majd a maradékot 60 ml dietiléterrel mossuk és a mosófolyadékot dekantálással eltávolítjuk. A visszamaradt olajos anyagot 6 ml jégecetben feloldjuk, majd a kapott oldathoz 50 ml dietilétert .adunk. A kivált csapadékot kiszűrjük, majd 100 ml etilacetát és 60 ml víz elegyében oldjuk. Az etilacetátos fázist elválasztjuk, majd 50—50 ml vízzel kétszer mossuk. Ezután az etilacetátot ledesztilláljuk, a maradékhoz pedig 100 ml dietilétert adunk. Az ekkor képződő csapadékot kiszűrjük, 630 mg (40.1",,) mennyiségben a lépés címadó vegyületét kapva, amelynek olvadáspontja 78—80 C ; [a]fj = —26,4" (c = 0,5, dimetilformamidban); Rf= 0,24 9:1:0,5 arányú kloroform: metanol : ecetsav eleggyel, mint futtatószerrel. Elemzés a C2,H23O8N4S20.5CH3COOC2H5 képlet alapján : számított: C: 48,67%. H: 4.79%. N: 9.87%„ S: 11,30",,; talált: C: 48,40%. H: 4,38"%, N: 10,00%,, S: 10.89";,. (c) lépés: Cbl-His-Tac-NH, előállítása 10 ml dimetilformamidban feloldunk 600 mg ('.15 mmól) Cbl-His(Tos)-Tac-OH-t, majd a kapott oldathoz hűtés közben 312 mg (2,30 mmól) HOBT-NH,-t és 356 mg (1,725 mmól) DCC-t adunk. Az így kapott reakcióelegyet 24 órán át keverjük, majd a képződött diciklohexil-karbamidot kiszűrjük és a szürletet vákuumban bepároljuk. A maradékhoz 40 ml dietilétert adunk, majd az így kapott olajos terméket 40—40 ml dietiléterrel kétszer mossuk, a mosófolyadékot mind a kétszer dekantálva. A terméket ezután 60 ml etilacetát és 40 ml víz elegyében feloldjuk, majd a vizes fázist elválasztjuk. 50 ml etilacetáttal mossuk és fagyasztva szárítjuk. Az így kapott port feloldjuk néhány ml n vizes ccetsavoldatban. majd a kapott oldatot 2,5-125 cm méretű, Sephadex LH—20 géllel töltött oszlopon bocsátjuk át. A kivánf termékben dús, 250. és 280. ml 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
