177515. lajstromszámú szabadalom • Eljárás TRH-analógok előállítására
11 177515 12 7. példa Cbl-His-Pip-NH2 előállítása 390 mg (0,003 mól) y-karboxi-y-butirolaktonból a 6. példa (b) lépésében leírt módon pentaklórfenilésztert állítunk elő. 1,20 g (0,003) mól Z-His-Pip-NH2-ből kiindulva a 2. példa (c) lépésében leírt módon N,N-dimetilformamidos H-His-Pip-NH2-oldatot állítunk elő. Ezt az oldatot egyesítjük az előző műveletben kapott oldattal, és a reakcióelegyet 12 órán át 4 C°-on keverjük. A melléktermékként kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot etilacetáttal eldörzsöljük. A kapott porszerű anyagot 50—50 ml forró acetonitrillel kétszer mossuk, és 10 ml 0,1 n vizes ecetsavoldatban oldjuk. Az oldhatatlan anyagot kiszűtjük, és a szűrletet 5,5 x 40,0 cm méretű, Sephadex LH—20 géllel töltött oszlopon bocsátjuk át. A kívánt termékben dús, 110. ml és 180. ml közötti frakciókat egyesítjük és fagyasztva szárítjuk. 400 mg terméket kapunk acetátsó formájában; [aß = —49,1° (c = 0,86, vízben). Rr = 0,45 [az I. példa (c) lépésében megadott körülmények között]. Elemzés a C17H23O5N5 1/2 CHjCOOH 3 H20 képlet alapján : számított; C: 46,85%, H: 6,77%, N: 15,18; talált; C; 46,62%, H; 5,68%, N: 15,35%. 8. példa Cbl-His-Pro-NH-CHj előállítása A 6. példa (b) lépésében leírt módon 520 mg (0,004 mól) y-karboxi^-butirolaktonból kiindulva pentakiórfenil-észtert állítunk elő. 1,46 g (0,004 mól) BOC-His-Pro-N EICH,-ból a 3. példa (c) lépésében közöltek szerint N,N-dimetilformamidos H-His-Pro-NH-CH,-oldatot készítünk. A két oldatot egyesítjük, és a kapott elegyet 12 órán át 4 C’-on keverjük. A melléktermékként képződött diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetáttal eldörzsöljük. A kapott porszerű anyagot acetonitril és etilacetát felhasználásával kétszer átcsapjuk, majd kevés 0,1 n vizes ecetsav-oldatban oldjuk. Az oldhatatlan anyagot kiszűrjük, és a szűrletet 5,5 x 40,0 cm méretű, Sephadex LH—20 géllel töltött oszlopon bocsátjuk át. A kívánt termékben dús, 110. ml és 190. ml közötti frakciókat egyesítjük és fagyasztva szárítjuk. 860 mg terméket kapunk acetátsó formájában; [«]f> = —68,0 (c = 0,63, vízben); Rf = 0,35 [az 1. példa (c) lépésében megadott körülmények között] Elemzés a C|7H_„0,N, 1/2 CHjCOOH 3 H20 képlet alapján: számított: C: 46,85%, H : 6,77%, N : 15,18%; talált: C: 46,88%, H: 5,79%, N: 15,17%. v 9. példa Cbl-His-Pro-NHCH2CH,CH2CH, előállítása A 8. példában leírt módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy 520 mg (0,004 mól) y-karboxi-y-butirolaktonból és 1,63 g (0,004 mól) BOC-His-Pro-NHCH2CH2CH2CHjból indulunk ki. 852 mg terméket,kapunk hemiacetátsó formájában; [<x]d — -66,4° (c = 0,67, vízben). Rf =■• 0,60 [az 1. példa (c) lépésénél ismertetett körülmények között]. Elemzés a C2oH2905N5l/2 CH7COOH 3,5 H20 képlet alapján : számított: C: 49,21%, H: 7,47%, N: 13,67%; talált : C : 48,85%, H : 6,40%, N : 13,80%. 10. példa Cbl-His-Pro-NHCH2CH2C6H5 előállítása A 8. példában leírt módon járunk el, azzal a különbséggel, hogy 520 mg (0,004 mól) y-karboxi-y-butirolaktonból és 1,82 g (0,004 mól) BOC-His-Pro-NHCH2CH2C6H5-ből indulunk ki. 517 mg terméket kapunk hemiacetátsó formájában; [a]n = -78,8° (c = 0,52, vízben). Rr= 0,63 [az 1. példa' (c) lépésénél ismertetett körülmények között]. Elemzés a C24H2905N5-l/2 CH3C00H-6H20 képlet alapján: számított: C: 49,58%, H: 7,16%, N: 11,57%; talált : C : 49,63%, H : 5,43%, N : 11,96%. 11. példa Oct-His-Pro-NHCH2CH2CH2CH2CH3 előállítása (a) lépés : Z-His-Pro-O'Bu előállítása 10,0 g (0,033 mól) Z-Pro-O'Bu-t metanolos közegben, 1 g palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. A katalizátort kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékhoz 9,1 g (0,03 mól) Z-His-NHNHrből előállított, hideg, 150 ml etilacetáttal készült Z-His-N,-oldatot adunk. Az elegyet 72 órán át 4 C°-on keverjük, majd 100—100 ml 5%-os vizes nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és 100—100 ml vízzel kétszer mossuk, végül az oldószert csökkentett nyomáson lepároljuk. A maradékot 80 ml petroléterrel eldörzsöljük, és 50 ml etilacetatból átkristályosítjuk. 9,5 g (71,4%) terméket kapunk ; op.: 143—145 C ; Md = —41,7 (c = 0,47, dimetilformamidban). Elemzés a C2,H30O5N4 képlet alapján: számított: C: 62,42%, H: 6,83%, N: 12,66%; talált: C: 62,15%, H: 6,75%, N: 12,71%. (b) lépés: Oct-His-Pro-OH előállítása 0,01 mól (4,42 g) Z-His-Pro-O’Bu-ból katalitikus hidrogénezéssel előállított H-His-Pro-O'Bu, 1,61 g (0,01 mól) 3-oxo-5-karboxiperhidro-l,4-tiazin és 1,79 g (0,01 mól) HONB dimetilformamiddal készített oldatához 2,06 g (0,01 mól) DCC-t adunk, és a reakcióelegyet 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált karbamidot leszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, a szilárd anyagot leszűrjük, és foszforpentoxid fölött vákuumban szárítjuk. A száraz, poralakú anyaghoz a terc-butilészter-csoport lehasítása céljából 25 ml trifluorecetsavat adunk, és az elegyet 3 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. A sav fölöslegét vákuumban lepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, majd a szilárd anyagot leszűrjük és vákuumban szemcsés nátriumhidroxid fölött szárítjuk. A száraz, poralakú anyagot 9:1 arányú kloroform metanol elegyben oldjuk, és az oldatot 5,0 x 8,0 cm méretű, szilikagéllel töltött oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot 300 ml 9:1 arányú kloroform:metanol eleggyel mossuk, majd 6:4 arányú kloroform ; metanol eleggyel eluáljuk. A 220. ml és 305. ml közötti főfrakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson bepárqljuk. A maradékot jeges hűtés közben 50 ml 0,2 n vizes sósavoldatban oldjuk, és« kapott ol-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
