177515. lajstromszámú szabadalom • Eljárás TRH-analógok előállítására
7 177515 8 Elemzés a CwH,504N5 H20 képlet alapján: számított: C: s'7,54%, H: 6,52%, N: 16,78%; talált : C : 57,47%, H : 6,48%, N : 15,46%. (c) lépés : Oct-His-Pip-NH, előállítása 12 ml 25%-os ecetsavas hidrogénbromid-oldathoz 1,20 g (0,003 mól) olajos Z-His-Pip-NH2-t adunk. 110 perc elteltével az elegyhez 100 ml étert adunk, majd a kivált csapadékot leszüijük és nátriumhidroxiddal töltött exszikkátorban 12 órán át szárítjuk. A száraz, poralakú anyagot 15 ml N,N-dimetilformamidban oldjuk, és az oldatot hűtés közben 0,84 ml (0,006 mól) trietilaminnal semlegesítjük. A kivált sót leszűijük, és a szűrletet közvetlenül felhasználjuk a következő reakciólépésben. 484 mg (0,003 mól) 3-oxo-5-karboxíperhidro-l,4-tiazin és 540 mg (0,003 mól) HONB 5 ml N,N-dimetilformamiddal készített oldatához jeges hűtés közben 618 mg (0,003 mól) DCC-t adunk. A reakcióelegyet 3 órán át keverjük, majd az így kapott, aktivált észtert tartalmazó oldatot az előző műveletben kapott, aminvegyületet tartalmazó oldathoz adjuk. A kapott reakcióelegyet 12 órán át 4 C°-on keverjük. A melléktermékként kivált diciklohexil-karbamidot leszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot éterrel eldörzsöljük. Az így kapott porszerű anyagot 100 ml 1:9 arányú metanol:kloroform elegyben oldjuk, és az oldatot 2,5 x 16,0 cm méretű, szilikagéllel töltött oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot 700 ml 1:9 arányú metanol : kloroform eleggyel mossuk, majd 4:6 arányú metanol : kloroform eleggyel eluáljuk. A kívánt termékben dús frakciókat egyesítjük, és az oldószert csökkentett nyomáson lepároljuk. A maradékot kevés 0,1 n vizes ecetsav-oldatban oldjuk, és az oldatot 5,5 x 40,0 cm méretű, Sephadex LH-20 géllel töltött oszlopon bocsátjuk át. A kívánt termékben dús frakciókat egyesítjük és fagyasztva szárítjuk. 740 mg terméket kapunk acetátsó formájában; [a]21 = —52,3° (c = 0,70, vízben); Rf = 0,50 [az 1. példa (c) lépésénél ismertetett körülmények között]. Elemzés a C17H,404N,,SCH3COOH-4 H,0 képlet alapján: számított: C: 42,21%, H: 6,71%, N: 15,55%, S: 5,93%; talált: C: 41,94%, H: 5,38%, N: 16,00%, S: 6,48%. Aminosav-elemzés eredménye (6 n vizes sósavoldatban 24 órán át 110 C-on végzett hidrolízis után) : His : 0,93 (1), s-karboximetil-cisztein: 1,03 (1), Pip: 1,00 (1); átlagos kitermelés: 94,2%. 3. példa Oct-His-Pro-NH-CHj előállítása (a) lépés: Z-Pro-NH-CH3 előállítása 12,5 g (0,05 mól) Z-Pro-OH és 9,8 g (0,055 mól) HONB 100 ml dioxánnal készített oldatához hűtés közben 11,3 g (0,055 mól) DCC-t adunk. Az elegyet 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük, és a melléktermékként kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük. A szűrlethez erélyes keverés közben 5,06 g (0,075 mól) metilamin-hidrokloridot, 10,5 ml (0,075 mól) tríetilamint és 10 ml vizet adunk. 12 óra elteltével az oldószert lepároljuk, és a maradékot etilacetátben oldjuk. Az etilacetátos oldatot 5%-os, vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és 1 n vizes sósavoldattal mossuk, szárítjuk, majd az etilacetátot lepároljuk. Az olajos maradékot petroléterrel eldörzsöljük, és a kapott nyers kristályokat etilacetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. 8,2 g (63,3%) kristályos terméket kapunk; op.: 48.0— 49,0 C°; [tx]^1 = —28,1° (c = 0,68, dimetilformamidban). Elemzés a C,4H|sO,N, képlet alapján: számított: C: 64,10%, H: 6,92%, N: 10,68%; talált : C : 64,03%, H : 6,92%, N : 10,65%. (b) lépés: BOC-His-Pro-NH-CHj előállítása 5,2 g (0,02 mól) Z-Pro-NH-CH3-ból ismert módon, katalitikus redukcióval H-Pro-NH-CH3-t állítunk elő. 11,8 g (0,02 mól) BOC-His(Tos)-OH-DCHA-t etilacetátban szuszpendálunk, és a szuszpenziót 110 ml jéghideg, 0,2 n vizes kénsavoldattal alaposan összerázzuk. Az etilacetátos fázist elválasztjuk, vízzel kétszer mossuk, szárítjuk, majd az etilacetátot csökkentett nyomáson lepároljuk. A kapott olajos maradékot és a fent ismertetett műveletben kapott H-Pro-NH-CHj-t 200 ml 1:1 arányú acetonitril:metilénklorid elegyben oldjuk, és az oldathoz jéghütés közben 4,12 g (0,02 mól) DCC-t adunk. A kapott elegyet 12 órán át keverjük. A melléktermékként kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott olajos maradékot 20 ml N,N- dimetilformamidban oldjuk, és az oldathoz 2,70 g (0,04 mól) Hobt-t adunk. Az elegyet 5 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd az oldószert vákuumban lepároljuk, és a maradékot 200 ml etilacetátban oldjuk. Az etilacetátos fázist 100-100 ml vízzel háromszor extraháljuk. Az egyesített vizes fázist nátrium-hidrogénkarbonáttal pH = 8 értékre lúgosítjuk, nátriumkloriddal telítjük, majd 150-150 ml etilacetáttal háromszor extraháljuk. Az etilacetátos fázist telített, vizes nátriumkloríd-oldattal kétszer mossuk, és vízmentes nátriumszulfát fölött szárítjuk. Az etilacetátot csökkentett nyomáson lepároljuk, és az olajos maradékot petroléterrel eldörzsöljük. A kapott poralakú anyagot leszűrjük. 2,60 g (35,6%) terméket kapunk ; op. : 75.0— 80,0 C°, [<x]2J = -22,T (c = 0,74, N,N-dimetilformamidban). Elemzés a C17H7704N5 képlet alapján: számított: C: 55,87%, H: 7,45%, N: 19,17%; talált : C : 56,16%, H : 7,55%, N : 18,39%. (c) lépés: Oct-His-Pro-NH-CH, előállítása 1,46 g (0,004 mól) BOC-His-Pro-NH-CH315 ml 25%-os ecetsavas hidrogénbromid-oldattal készített oldatát 20 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az elegyhez 150 ml étert adunk, a kivált csapadékot leszűrjük, és nátriumhidroxiddal töltött exszikkátorban 12 órán át szárítjuk. Az igy kapott száraz, poralakú anyagot 15 ml N,N-dimetilformamidban oldjuk, és az oldathoz hűtés közben 1,12 ml (0,008 mól) tríetilamint adunk. A kapott sót leszűrjük, és a szűrletet közvetlenül felhasználjuk a következő reakciólépésben. 645 mg (0,004 mól) 3-oxo-5-karboxiperhidro-l,4-tiazin és 720 mg (0,004 mól) HONB 5 ml N,N-dimetilformamiddal készített oldatához hűtés közben 825 mg (0,004 mól) DCC-t adunk, és az elegyet 3 órán át keveijük. Az így kapott oldathoz hozzáadjuk az előző műveletben kapott, aminvegyületet tartalmazó szűrletet, és a reakcióelegyet 12 órán át 4 C°-on keveijük. A melléktermékként kivált diciklohexil-karbamidot kiszűijük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot éterrel eldörzsöljük, és a kapott poralakú anyagot 100 ml 1:9 arányú metanol:kloroform elegyben oldjuk. Az oldatot 5,0 x 12,0 cm méretű, szilikagéllel töltött oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot 500 ml 1:9 arányú metanol : kloroform eleggyel mossuk, majd 4:6 arányú metanol : kloroform eleggyel eluáljuk. A kívánt termékben dús, 150 ml és 250 ml közötti frakciókat egyesítjük és be5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
