177512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás daunorubicin-származékok előállítására
3 177512 4 Htjuk és kloroformmal extraháljuk, amíg az extraktumok már nem színesek. A szerves fázist vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és vákuumban 50 ml-re besűrítjük. A visszamaradó piros oldatot vízmentes metanolos sósavval pH = 3,5-re (kongóvörös) állítjuk, dietiléter felesleggel elegyítjük és így 2,8 g tiszta 13-dihidrodaunobicint (B) kapunk hidroklorid formájában. 2.8 g (B) képletű vegyület 300 ml kloroformmal készített szuszpenzióját I óra hosszat 0 C-on 20 ml trifluorecetsavanhidriddel kezeljük. A reakcióelegyet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 200 ml metanolban oldjuk és vizes telített nátrium-hidrogénkarbonát oldattal semlegesítjük. 30 perc múlva szobahőmérsékleten az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a vizes oldatot kloroformmal extraháljuk, amíg az extraktumok már nem mutatnak színeződést. A szerves fázist vízzel mossuk és vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és 30 ml-re besűrítjük, petroléter felesleggel elegyítjük és így 2,3 g tiszta N-trifluoracetil-13- -dihidrodaunorubicin C-t kapunk. Olvadáspont: 164—166 C (bomlik); vékonyrétegkromatográfia Merck Kieselgél 60 F,54 oszlopon kloroform és aceton oldószer rendszer eluálószerként való alkalmazásával (2:1 V/V) Rf = 0,25 értéket mutat. 2. példa 9-Dezacetil-9-oxo-N-trífluoraeetildaunorubicin D 2.4 g IC) képletű vegyület 120 ml tere butilalkohollal készített oldatát 120 ml vízben oldott 1,6 g nátrium-perjodáttal kezeljük. A reakcióelegyet 2 óra hosszat szobahőmérsékleten kevertetjük. A kicsapódott (D) képletű vegyületet leszűqük, vízzel mossuk, vákuumban szárítjuk. 1,4 g tiszta (D) képletű vegyületet kapunk, olvadáspont : 200 °C (bomlik), vékonyrétegkromatográfia Merck—Kieselgel 60 F^ oszlopon kloroform és aceton oldószer elegy eluálószerként történő alkalmazásával (2:1 V/V) = Rf = 0,57. Analízis: a C,7H,4F,NOMl képlet alapján számított: C: 55.9",,: H: 4.18"„: talált: C: 55,6%; H: 4.26",,. 3. példa 9-Dezacetíldaunorubicinhidroklorid G és 9-Dezacetil-9-epidaunorubicinhidrokIoríd H 1,7 g (D) képletű vegyület 250 ml dioxánnal és 50 ml vízzel készített oldatát vizes In sósavval pH = 3-ra állítjuk és 1 g nátriumcianobórhidriddel kezeljük 24 óráig szobahőmérsékleten, miközben a savas körülményeket In sósav hozzáadásával tartjuk fent. A reakcióelegyet 300 ml vízzel elegyítjük és ötször extraháljuk 200 ml kloroformmal. A vízzel mosott és nátrium-szulfát felett szárított szerves fázist vákuumban szárazra pároljuk. 1 g (E) és (F) képletű vegyületet tartalmazó terméket kapunk, melyet szilikagél oszlopon növekvő mennyiségű acetont tartalmazó kloroformmal, mint eluálószerrel kromatografálunk és így 0,85 g tiszta (E) képletű terméket kapunk. Olvadáspont: 204—206 °C (bomlik). Merck—Kieselgel 60 F254 vékonyrétegkromatográfia kloroform-aceton 2:1 V/V arányú oldószer rendszer alkalmazásával Rf=0,44-t mutat. 0,1 g tiszta (F) képletű vegyület is keletkezik. Olvadáspont : 180—182 °C (bomlik) és Rf az E képletű vegyületnél használt körülmények mellett 0.3. Az N-trifluoracetilcsoport hidrolízise a. következőképpen megy végbe. 50 ml 0,1 n nátrium-bidroxidot adunk az elegyhez, a pH-t 30 perc alatt 0 °C-on O.ln sósav hozzáadásával 8,4 értékre állítjuk be és az oldatot ismételten mossuk kloroformmal. Az öszszeöntölt extraktumokat vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és vákuumban 20 ml-re bepároljuk. Sztöchiometrikus mennyiségű metanolos sósav és dietiléter hozzáadásával vörös csapadékot kapunk, ezt elválasztjuk, dietiléterrel mossuk és vákuumban szárítjuk. A (G) képletű vegyület bomlás közben 166—167 cC-on olvad; [a]^=282° (c =- 0,15 metanolban), vékonyrétegkromatográfia Kieselgel F,54 lemezeken (Merck) kloroform és aceton (13:6:1 V/V) arányú oldószer elegy alkalmazásával az Rf = 0,55. Analízis: a C,5H,7N04HC1 képlet alapján számított: C: 57,52%; H: 5,42%; N: 2,68% talált : C : 57.16% ; H : 5,45% ; N : 2,42%, A H vegyület 176 ’C-on bomlás közben olvad, Rf a G vegyületnél alkalmazott körülmények között = 0,4. Analízis : a C2SH27N09-HC1 képlet alapján : számított: C: 57.52%; H: 5,42%; N: 2.68% talált : C : 57,61 % ; H : 5,52%, ; N : 2,53%. [ot]p = + 104 (c = 0,148 metanolban). 1. táblázat Doxorubicin (NSC 123127), 9-dezacetildaunorubicin (G) (NSC 268708) és 9-dezacetil-9-epi-daunorubicin (H) (NSC 268709) aktivitását hím C.D.F. egereken mutattuk ki P 388 limfocita-leukokémia esetében (tumorinoculum 106 sejt, i.p.), a kezelés 1—9 napig i.p. történt). 4108 számú kísérlet, az adatokat a NCI előírások szerint kaptuk A.D. Little Inc. készüléken. Vegyület Dózis mg/kg T/0* Doxorubicin 4 83 2 180 1 171 0,5 142 0,25 152 G 25 73 12,5 228 6,25 180 3,13 174 1,56 155 H 25 66 12,5 66 6,25 171 3,13 157 1,56 142 a) a kezeletlen kontroll százalékában kifejezett közepes túlélési idő 2. táblázat Doxorubicin (NSC 123127) és 9-dezacetildaunorubicin (G) (NSC 268708) hatását mértük him CDF, egerek P—399 limfocita leukokémiája ellen (Tumorinoculum 106 sejt, i.p.). Kezelés az 5., 9. és 13. napon — 4832 számú kísérlet, az adatokat az NCI előírásai szerint kaptuk A.D. Little készüléken. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
