177261. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új aminoglikozid-származékok előállítására
15 177261 16 A 68 -73. sz. frakcióból inert eluátumot (47 mg) 1.5 ml vízben oldjuk, 5 ml Amberlite CG 50-t (NH.- ) tartalmazó oszlopon adszorbeáljuk, az oszlopot gradiens módszerrel 480 ml vízzel és 480 ml 1 n ammőniumhidroxiddal eluáljuk. Egy frakció 5 ml. A 40—43. sz. frakcióból nyert eluátumot liofilizáljuk. 16 g 1—N-—(4-hidroxi-piperidin-4-karbonil)-tobramicint kapunk. Kitermelés: 4,9%. VRK: (kovasavgél 60 F,.4; Merck): RF = 0,35 (metanol és tömény vizes ammóniumhidroxid-oldat 1:1 arányú elegyében) : a tobramicin RF értéke 0,58. 5. példa DL-1 -N-(3-hidroxi-pirrolidin-3-karbonil)-tobramicin előállítása. a) 174 mg (0,3 millimól) tetra -N-formil-tobramicint (előállítása a vizsgálat nélkül nvilvánosságrahozott 50—35129 sz. japán szabadalmi bejelentésben leírt módszer szerint történik) és 131 mg (1,2 ekvivalens) N-hidroxi-szukcinimido-DL-l-benziloxikarbonil-3-hidroxi-pirrolidin-3-karboxilátot 10 ml dimetilformamidban oldunk és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 órán át állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk. A kapott maradékot etilacetáttal kezeljük. A kiváló csapadékot szűrjük és etilacetáttal mossuk. A maradékot (266 mg) 140 g 10%-os palládium-szén katalizátor jelenlétében 10 ml víz, 8 ml metanol és 1 csepp ecetsav elegyében hidrogénezzük. A katalizátor eltávolítása után 204 mg nyers tetra-N-formil-DL-1 -N-(3-hidroxi-pirrolidin-3-karbonil)-tobramicint kapunk. b) Tetra-N-formil-DL-l-N-(3-hidroxi-pirrolidin-3-k.irbonil)-tobramicin hidrolízise. i) 5%-os sósavval és metanollal. 204 mg fentiek szerint előállított tetra-N-formíl-DL-1 -N-(3-hidroxi-pirrolidm-3-karboniI)-tobramicint 0,22 ml vízben oldunk, az oldathoz 1,96 ml 5%-os metanoios sósavat adunk (0,55 ml tömény sósav és 6 ml metanol elegye) és a reakcióelegyet olajfürdőn 36 C -on 22,5 órán át hidroíizáljuk. A reakció befejeződése után a sósav feleslegét 6 ml Amberlite IR—45-el történő kezeléssel eltávolítjuk. A gyantát kiszűrjük és vízzel mossuk. A mosófolyadékokkal egyesített szűrletet vákuumban bepároljuk. A maradékot (197 mg) 25 ml Amberlite CG—50-t (NH±) tartalmazó oszlopon kromatografáljuk és gradiens módszerrel 500 ml vízzel és 500 ml 1 n ammóniumhidroxid-oldattal eluáljuk. A 64—78. sz. frakciókból nyert eluátumokat kondenzáljuk és liofilizáljuk. 98 mg DL-l*N-(3-hidroxipirrolidin-3-kafbonil)-tobramicint kapunk. Kitermelés: 46,4% (mint hisz-karbonát), to# = + 85,2 ± 1,2’ (c = 1,046%, vízben). VRK: (kovasavgél, 60 F,54; Merck) RF = 0,40 (izopropilalkohol és tömény vizes ammóniumhidroxid 1:1 arányú elegyében), a tobramicin RF értéke 0,56. ii) Hidrazin-eeetsav eleggyel. 206 mg fentiek szerint előállított tetra-N-formil-DL-l-N-(3-hidroxi-pirrolidin-3-karbonil)-tabmmicint 20 ml hidrazin-monohidrát és 2.63 ml ecetsav elegyében oldunk (pH = 6) és az oldatot keverés közben 6 órán át visszafolyató hűtő alkalmazása mellett forraljuk. A reakcióelegyet vízzel 400 ml-re hígítjuk, 1O0 ml Amberlite CG—50-t (NHf ) tartalmazó oszlopon kromatografáljuk, 1 liter vízzel és 1 liter 0,4%-os ammóniumhidroxiddal mossuk, majd 0,8%-os ammóniumhidroxiddal eluáljuk. Egy frakció 12 ml, A 20—47 sz. frakciót vákuumban bepároljuk és liofilizáljuk. 125 mg DL-I-N-í3-hidroxi-pirrolidin-3-karbonü)-tobramicint kapunk. Kitermelés 54,6% (mint 3H,CO, só). [ot]$ = + 77,0±1,1 (c - 1,64%. vízben). l lemi analízis C,,H44NhOu -3H,CO, képletre számított C% = 40,75: H% = 6,57; N% = 10,96 talált C% = 40,62 ; H% = 6,39 ; N% = 10,80 A kapott termék az i) módszer szerint előállított vegyület hiteles mintájával azonos. 6. példa l-N-(l-etil-3-hidroxi-pirrolidin-3-karbonil)-tobramicin előállítása. 2,090 g (7,16 millimól) i-benziloxikarbonil-3-hidroxi-pirrolidin-3-karbonsavat, 4,160 g (7,16 millimól) 3,2\6’,3”-tetra-N-formil-tobramicint, 910 mg N-hidroxi-szukcinimidet és 1,870 g (7,16 millimól) diciklohexilkarbodiimidet 50 ml N.N-dimetilformamidban oldunk és a reakcíóelegyet szobahőmérsékleten egy éjjelen át állni hagyjuk. A kiváló diciklohexilkarbodiimidet leszűrjük és 5 ml N,N-dimetilformamiddal mossuk. A mosófolyadékokkal egyesített szűrlethez 550 mg etilacetátot adunk. A kiváló csapadékot szűrjük, etilacetáttal mossuk, vízben oldjuk és vákuumban bepároljuk. A maradékot (6,00 g) 70 ml víz és 20 ml metanol elegyében oldjuk és 2,00 g 10%-os palládium-aktívszén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A számított mennyiségű hidrogén felvétele után a katalizátort leszűrjük és vízzel mossuk. A mosófolyadékokkal egyesített szűrletet vákuumban bepároljuk. Színtelen por alakjában 5.30 g l-N-(3-hidroxi-pirroIidin-3-karbonil)-3,2',ó',3”-tetraformil-tobramicint kapunk. 228 mg (0,3 millimól) fenti por és 0,5 ml víz oldatához 1,0 ml acetonitrilt adunk. Az elegy két fázisra Válik szét, majd 0.48 ml frissen desztillált vizes acetaldehid-oldat (6,77 g acetaldehid és 50 ml viz oldata) hozzáadásakor ismét homogén lesz. Azonnal 30 mg nátriumcránbórhidridet adunk hozzá, miközben az elegy pH-ját ecetsavval 7-re állítjuk be. Az elegyeí 2 óra múlva betöményítjük és a maradékhoz 4 ml etilacetátot adunk, miközben az elegyet alaposan keverjük. A kiváló port leszűrjük, etilacetáttal mossuk, 1 ml víz és 1 ml izopropilalkohol elegyében oldjuk, majd 13,5 g kovasavgél 60—t (Merck et Co. cég terméke) tartalmazó oszlopon kromatografáljuk és izopropilalkohol, tömény ammóniumhidroxid és kloroform 2:1:1 arányú elegyével eluáljuk. Egy frakció 10 g. A 11—30. frakcióból nyert eluátumot bepároljuk és a maradékot (138 mg) 1,46 ml hidrazin-hidrát és 1.73 ml ecetsav 14,6 ml vízzel képezett oldatában oldjuk. A reakcioelegyet 6 órán át visszafolyató hűtő alkalmazása mellett forraljuk, 261 ml vízzel hígítjuk és 73 ml Amberlite CG—50-t (NH41- fázis) tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot 680 ml vízzel mossuk, majd 0,4%-os vizes ammóniumhidroxid oldattal eluáljuk. Egy frakcro 10 g. , . A 70—75. sz. frakcióból nyert eluátumot aktívszennel kezeljük, az elegyet mikroanalitikai célokra alkalmas pyrex szűrőn át szüljük (gyártó cég: Nihon Millipore Ltd) és a szűrletet bepároljuk. Színtelen por alakjában 52,2 mg l-N-(l-etil-3-hidroxí-pirroIidm-3-karbonil)-tobraniicmí kapunk. A fenti terméket kevés vízben oldjuk, a pH-t 0,0955 n 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
