177134. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-helyzetben alfa-hidroxisavat tartalmazó angiotenzin-II antagonista hatású angiotenzin-II analogok előállítására
177134 a IV általános képletű vegyületekből először a dinitrofenilcsoportot távolítsuk el, majd egy lépésben - katalitikus hidrogenolízissel - jussunk el az I általános képletű vegyületekhez. Az I általános képletű vegyületeket önmagában ismert módon, célszerűen karboximetilcellulózos ioncserélő kromatográfiával tisztítjuk. Ennek során a vegyületeket többnyire lioíilizált porok alakjában kapjuk, amelyek alkalmasak különböző sók, illetve komplexek képzésére. Az I általános képletű vegyületek antagonista hatását altatott hímnemű macskákon vizsgáltuk. A vérnyomás mérését a nyaki verőéren keresztül végeztük. A vizsgálatok úgy történtek, hogy az egyik oldali combvénába Hypertensin (CIBA) infúziót adtunk 0,5 jug/kg/perc sebességgel. Miután a vémyomásemelkedés stabilizálódott, a kísérleti anyagokat és a Saralasin összehasonlító anyagot egyszeri dózisban intravénásán vagy szubkutan adtuk vizes fiziológiás, illetve vivőanyagot tartalmazó oldatban és mértük a vérnyomás csökkenését. Az 1. táblázat az intravénás adagolás hatására bekövetkező artériás vérnyomáscsökkenést szemlélteti. Az adatok hat kísérlet átlagát és a középérték szórását mutatják. 1. Táblázat Az 1-helyzetben a-hidroxisavakat tartalmazó angiotenzin-II analógok hatása a vérnyomásra, angiotenzin-II infúzió alatt Analógok Vémyomáscsökkenés (Hgmm) 10jug/kg 20 yug/kg i. v. i. v. beadásakor A táblázat adatai szerint új vegyületeink szubkután alkalmazás mellett még 60 perc múlva is szignifikánsan csökkentik a kísérletesen előidézett magas vérnyomást. 5 A találmány szerinti peptideket, valamint azok sóit a szokásos gyógyszerkészítmények formájában használhatjuk fel a gyógyászatban. Az ilyen gyógyszerkészítmények a találmány szerinti vegyületeket enterális vagy parenterális beadásra alkal- 10 más szervetlen vagy szerves vivőanyag kíséretében tartalmazzák. így a gyógyszerkészítmények lehetnek szilárd liofilizátumok, ekkor vivőanyagként peptidekkel nem reagáló vegyületek, például szénhidrátok jöhetnek számításba, lehetnek híg vagy 15 tömény szuszpenziók és emulziók, amelyek különböző tartósító és stabilizáló segédanyagokat is tartalmaznak. " A gyógyszerkészítmények felhasználhatók diagnosztikumként a renális hipertenziók differenciált 20 megkülönböztetésére, továbbá terápiásán is minden olyan szindrómánál, ahol a kóroki szerepet az emelt renin vérszint játsza. A találmány szerinti eljárás foganatosítási módjait. az alábbi példák szemléltetik. 25 A példákban alkalmazott rövidítések a szakirodalomban használt rövidítéseknek felelnek meg [J. Biol. Chem. 247, 977 (1972)]. Az a-aminooxisavak rövidítésére a megfelelő aminosav szimbólum elé tett O-betűt használjuk: így OGly = aminooxiecet- 30 sav, OAla = o-aminooxipropionsav stb. Továbbá rövidítések: PFP = pentafluorfenil, Thr(Me) = treonin-O-metiléter. A vegyületek előállítása során a bepárlásokat mindig Büchi-féle Rotavapor készülékben végeztük. 35 Az olvadáspont meghatározások dr. Tottoli-féle (Büchi) készülékben történtek. A vékonyrétegkromatogramokat Stahl szerint készített, Kieselgel G (Merde) márkanevű szilikagél rétegen készítettük. A (hidroxiacetil1, Leu8)-Ang-II (hidroxiacetil1, Ile8)-Ang-II-31 ±4,7 -24 ±1,7-42 ± 2,8 -30 ±2,3 kromatogramok kifejlesztésére 40 szerelegyeket használtuk: 1. etilacetát : (piridin-ecetsav-víz a következő oldó= 20-6-11): 95 :5 (hidroxiacetil1, Thr/Me)8 -Ang-II-33 ±5,3-38 ± 4,1 2. 45 etilacetát : (piridin•ecetsav-víz =20-6-11):90:10 (L-a-hidroxipropionil1, Leu8)-Ang-II-32 ±3,7-40 ± 2,7 3, etilacetát : (piridin-ecetsav-víz = 20-6-11): 80:20 (L-a-hidroxipropionil1, Ile8 )-Ang-II-31 ± 3,3-38 ± 4,1 4. etilacetát : (piridin-ecetsav-víz = 20-6-11): 70:30 Saralasin-41 ±2,5 _ 50 5. n-butanol : ecetsav : víz =4:1:5 A táblázat adataiból látható, hogy valamennyi 6. n-butanol : ecetsav : : piridin : víz = 30 : 6 :20 :24 í-es helyzetben a-helyzetben hidroxilcsoportot tar-7. n-butanol : etilacetát : talmazó alifás karbonsavgyökkel helyettesített anecetsav : víz = 1 :1 :1 :1 giotenzin-II analóg jelentős vérnyomáscsökkentő hatással bír. A hatás nagysága a dózissal arányosan változik. Vizsgálatainkat kiterjesztettük az irodalomban nem alkalmazott szubkutan felhasználási módra is. Ez esetben a vizsgálandó anyagot tartalmazó fiziológiás konyhasó-oldathoz még karboximetilcellulózt, illetve zselatint is tettünk. Az eredmények, amelyek 5—5 állatrm végzett kísérletek átlagait, és a középérték szórását mutatják, a 2. Táblázatban láthatók. 55 A vékonyrétegkromatogramok előhívására egyrészt ninhidrin-oldatot használtunk, másrészt a szokásos klórozás után o-tolidin-kálium-jodid-oldattal hívtuk elő. 60 A papírelektroforetikus vizsgálatokat LMIM középfeszültségű horizontális készülékben (a Labor Műszeripari Művek Budapest, gyártmánya) végeztük MN 214 papíron (Machery-Nagel Co., NSzK), pH = 1,9-es pufferben glutaminsav mellett. A fe- 65 szültség 450 V, az idő 3 óra volt. 3
