177133. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-és helyzetben alfa-aminooxisavat tartalmazó angiotenzin-II-antagonista hatású angiotenzin-II analógok előállítására
3 177133 4 Engl. J. Med. 292, 1214 (1975), D. H. B. Streeten és munkatársai: Cire. res. 36 Suppl. 1. 125 (1975), H. R. Brunner és H. Gavras: Schweiz. Med. Wschr. 106, 1791 (1976)] igazolták a kutatás kezdeti feltételezését, miszerint az angiotenzin-II antagonista hatású analógjai alkalmasak lesznek a renin-függő hipertenziók diagnosztizálásában és esetenként kezelésében [D. Ganton és F. Gross: Med. Klin. 71, 2043 (1976), J. L. Marx: Science 194, 821 (1976), P. Needelman és GR. Marshall: Fed. Proc. 35, 2486 (1976)]. Az eddig előállított angiotenzin-Il analógok szerkezetének és biológiai hatásának összevetése számos fontos információt szolgáltatott az agonista-antagonista hatás értelmezésében TM. C. Khosla és munkatársai: „Handbook of Experimental Pharmacology” Vol. 37, I. H. Page és F. M. Bumpus es. 1974, G. R. Marshal: Fed. proc. 35, 2494 (1976)]. A jelenlegi kutatások homlokterében elsősorban a mellékhatásmentes, hosszabb biológiai felezési idővel bíró antagonisták előállítása áll [M. C. Khosla és munkatársai: J. Med. Chem. 19, 244 (1976), ibid. 20, 253 (1977)]. Azt találtuk, hogyha az angiotenzin-II molekulájában a 8-as helyzetű fenilalanint valamely alifás a-aminokarbonsav gyökével helyettesítjük miközben az 1 -helyzetbe valamely a-helyzetben aminooxicsoportot tartalmazó karbonsav gyökét építjük be, olyan angiotenzin-II kompetitiv inhibitorokhoz jutunk, amelyek az angiotenzin-II-vel kiváltott hipertenziót in vivo jelentős mértékben csökkentik és ezt a hatást szubkutan adásmód mellett is mutatják. A találmány értelmében úgy állítjuk elő az X—Arg—V al—Tyr—Ile —His—Pro—Y I I általános képletű vegyületeket, amely képletben X és Y jelentése a fenti, hogy valamely H—Arg(A)—Val—Tyr(B)—He—His(E)—Pro—Y—OG II II általános képletű reakcióképes heptapeptid-származékot, ahol A jelentése az Arg guanidinocsoportjának átmeneti megvédésére alkalmas, előnyösen nitro-, vagy tozilcsoport B jelentése a Tyr aromás hidroxilcsoportjának átmeneti megvédésére alkalmas csoport, előnyösen benzil- vagy szubsztituált benzilcsoport, E jelentése a His imidazolcsoportjának átmeneti megvédésére alkalmas csoport, így például dinitrofenil-csoport, G a C-terminális alifás aminosav karboxilcsoportjának védésére szolgáló olyan csoportot jelent, amely enyhe savas behatásoknak ellenáll, de katalitikus hidrogenolízissel vagy erősebb sav vagy lúg (vizes ásványi sav, illetőleg vizes alkoholos alkálifém-hidroxid-oldat) hatására eltávolítható, valamely Z-X-M III III általános képletű reakcióképes származékkal reágáltatjuk, ahol Z jelentése valamely acidolízissel vagy katalitikus hidrogenolízissel eltávolítható csoport, így például benziloxikarbonil, vagy t-butiloxikarbonil-csoport, X a fenti jelentésű és M jelentése hidroxilcsoport vagy valamely aktiváló csoport, előnyösen pivaloiloxi-, nitrofenoxi-, 2,3,5-triklórfenoxi-, pentaklórfenoxi-, pentafluorfenoxi-, N-szukcinimidoxi- vagy azidcsoport és a kapott Z-X -A rg( A)-V al-Ty r(B)-Ile —His(E)—Pro-Y-OG IV IV általános képletű vegyület védőcsoportjait szelektíven vagy egyszerre eltávolítjuk és kívánt esetben az I általános képletű vegyületet savaddíciós sójává alakítjuk. A szintézishez felhasznált II általános* képletű reakcióképes heptapeptid-származékokat bármely, peptidkémiában használatos módszerrel előállíthatjuk, így például a 168 431 számú magyar szabadalmi leírásban ismertetett eljárás alkalmazásával. Az eljárásban az oldalfunkciós csoportok védésére olyan védőcsoportokat kell használni, amelyek a kapcsolás utáni védőcsoport eltávolításakor alkalmazott acidolízis körülményei közt stabilak. A találmány szerinti eljárás egyik előnyös kiviteli módja szerint a C-terminális aminosav karboxilcsoportjának átmeneti védésére a p-nitrobenzilcsoportot (NB), a tirozin hidroxilcsoportjának védésére a benzilcsoportot használjuk, a hisztidin imidazol-gyűrűjét dinitrofenilcsopoittal és az arginin guanidinocsoportját tozilcsoporttal védjük. Ezek a védőcsoportok enyhe savakkal szemben stabilak, így a Boc-védőcsoport ezek károsodása nélkül eltávolítható. A dinitrofenilcsoport (Dnp) tiolízissel, míg a többi részben katalitikus hidrogenolízissel, részben cseppfolyós hidrogénfluoriddal távolítható el. Az I általános képletű vegyületeket önmagában ismert módon, célszerűen kaboximetilcellulózos inocserélő krorfiatográfiával tisztítjuk. Ennek során a vegyületeket többnyire liofilezett porok alakjában kapjuk, amelyek alkalmasak különböző sók, illetve komplexek képzésére. Az í álfálános képletű vegyületek angiotenzin-II-antagonista hatását altatott hímnemű macskákon vizsgáltuk. A vérnyomás mérését a nyaki verőéren keresztül végeztük. A vizsgálatok úgy történtek, hogy az egyik oldali combvénába Hypertensi (CIBA) infúziót adtunk 0,5 /ug/kg/perc sebességgel. Miután a vémyomásemelkedés stabilizálódott, a kísérleti anyagokat egyszeri dózisban intravénásán vagy szubkutan adtuk vizes fiziológiás, illetve vivőanyagot tartalmazó oldatban és mértük a vérnyomás csökkenést. Az 1. táblázat az intravénás adagolás hatására bekövetkező artériás vérnyomás csökkenést mutatja. A táblázat adatai közé felvettük a Saralasin hasonló körülmények közt mért hatását is. Az adatok 6 kísérlet átlagát és a középérték szórását mutatják. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
