177132. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH hatású terc-butilezett triptfént tartalmazó peptidek előállítására
9 177132 10 (93%) Z—Trp( 1 tBu)—ONSu-t kapunk. Op.: 90-92 °€. Z—Trp(l tBu)-Gly—OCH3 80 ml kloroformban 1,6 g (12,8 mmól) H—Gly—OCH3 • HCl-ot szuszpendálunk, 1,61 ml (11,7 mmól) trietilamint és 5,77 g (11,7 mmól) Z—Trp(l’—tBu)—ONSu-t adunk hozzá. 4 óra keverés után a kloroformot ledesztilláljuk és a nyers terméket 1-20 ml etilacetátban oldva vízzel, n sósavval és 8%-os- nátriumhidrogénkarbonát oldattal mossuk. Szárítás után az oldatot bepároljuk. 4,4 g (81%) Z—Trp(l’—tBu)-Gly—OCH3 marad vissza sárgás amorf por formájában. Rj = 0,68. Z-Arg-Trp(l ’-tBu)-Gly-OH 4,4 g (945 mmól) Z-Trp(r-tBu)-Gly-OCH3-t 100 ml metanolban oldunk, 1,09 g (12,1 mmól) vízmentes oxálsavat adunk hozzá és 0,5 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció befejeződése után a katalizátort kiszűrjük és az oldatot bepároljuk. A maradékhoz 100 ml étert és 20 ml 8%-os nátriumhidrogénkarbonát oldatot adunk, összerázás után a vizes részt háromszor 30 ml éterrel mossuk, az egyesített éteres oldatot szárítjuk és bepároljuk. Az így nyert H—Trp(l tBu)—Gly—OCH3 -t 15 ml dimetilformamidban oldjuk, 3,03 g (8,8 mmól) Z-Arg(HCl)-OH-t, 1,19 g(8,8 mmól) N-hidroxibenztriazolt és 1,85 g (9,0 mmól) DCC-t adunk hozzá. Másnap a kivált DCU-t leszűrjük, a dimetilformamídot ledesztilláljuk és a nyers terméket 100 ml kloroform, 20 ml n-butanol és 35 ml víz elegyében oldjuk. A szerves fázist kétszer 30 ml n sósavval mossuk, szárítás után bepároljuk. Az olajos maradék éter alatt megszilárdul. A nyers Z-Arg(HCl)-Trp(r-tBu)-Gly-OCH3-t 120 ml metanol és 50 ml víz elegyében oldjuk és 4,8 ml 4 n nátríumhídroxídot adunk hozzá. Egy óra múlva a reakcióelegyet ecetsavval semlegesítjük és a metanolt ledesztilláljuk. A Z-Arg-Trp(l’-tBu)-Gly-OH kristályosán kiválik. 50%-os etanolból kétszer átkristályosítjuk. 3,43 g (64%) benziloxikarbonil-tripeptidet kapunk, Op.: 163-165 °C, R? =0,27. Elemzés a C31H4iN706 összegképlet alapján: számított: N = 16,14%, talált: N = 15,92% BOC—Ser-Tyr-Ser-Met~Glu(OtBu)-His-Phe—OCH3 9,15 g (14,4 mól) Z-Glu(OtBu>- His-Phe-OCH3-t [L. Kisfaludy, M. Lőw, O. Nyéki, T. Szirtes, I. Schön: Ann. 1973,, 1421] 230ml metanolban oldunk és 1,5 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció befejeződése után a katalizátort kiszűrjük és az oldatot bepároljuk. Az így kapott tripeptid észtert 20 ml dimetilformamidban oldjuk és 6,2 ml (36 mmól) diizopropiletilamint adunk hozzá. 7^2 g (12,0 mmól) BOC-Ser-Tyr-Ser-Met—N2H3-ot [B. Isclin, R. Schwyzer: Helv. 44., 169. (1961)] 20 ml dimetilformamidban oldunk. Az oldatot -20 °C-ra hűtjük és keverés közben 14,8 ml (48 mmól) 3,24 n etilacetátos sósavoldatot, majd 1,86 ml (15,6 mmól) terc-butilnitritet csepegtetünk hozzá. A reakcióelegyet 5 percig —10 °C-on keverjük, majd újra -20°C-ra hütjük, hozzáadjuk a H-Glu(OtBu)-Hís-Phe-OCH3 diizopropiletilaminnal meglúgosított oldatát és 1 órán át -5 és 0 °C közötti hőmérsékleten, majd 20 órán át 0 °C-on tartjuk. Ezután a dimetilformamidot ledesztilláljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük, vízzel és éterrel mossuk. 11,55 g (90%) BOC-Ser—Tyr-Ser-Met—Glu(OtBu)—His-Phe—OCH3-t kapunk. Op.: 195-199 °C. Rf =0,52. B OC - S e r —Ï yr-Ser-Me t-Glu(OtBu)- His-Phe-N2H3 11,55 g (10,75 mmól) BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-OCH3-t 115 ml dimetilformamidban oldunk, és 2,62 ml (53,8 mmól) hidrazinliidrátot adunk hozzá. Az oldatot 20 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a dimetilformamidot ledesztilláljuk és a maradékot vízzel eldörzsöljük. Szűrés, szárítás után a nyers terméket 90 ml etanolban szuszpendáljuk, forrásig melegítjük, majd lehűlés után leszűijük. 8,3 g (72%) BOC-Ser~Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu )-His-Phe-N2H3-t kapunk. Op.: 210-214°C, R?=0,39. BOC~Ser-Tyr~Ser~Met~Glu(OtBu)~His~Phe~Arg-TrpO’-tBu) -Gly-OH 1,09 g (1,8 mmól) Z-Arg-Trp(r-tBu)-Gyl-OH-t 30 ml 80%-os ecetsavban oldunk és 0,15 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A reakció befejeződése után a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a maradékot éterrel megszilárdítjuk. Az így nyert H-Arg-TrpO’-tBu)-Gly-OH diacetátot 10 ml dimetilformamidban oldjuk és az oldatot 1,08 ml (6,3 mmól) diizopropiletilaminnal meglúgosítjuk. 1,6 g (1,5 mmól) BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe~N2N3 ot 16 ml dimetilformamidban oldunk az oldatot -20 °C-ra hűtjük, 2,4 ml (6,0 mmól) 2,5 n etil-acetátos sósavoldatot és 0,23 ml (1,93 mmól) terc-butUnitritet adunk hozzá, majd 5 percig -10°C-on tartjuk. Ezután újra -20°C-ra hűtjük és hozzáadjuk a H~Arg-Trp(l’-tBu)~-Gly- OH diizopropiletilaminnal meglúgosított oldatát. A reakcióelegyet 1 órán át -5 és 0 °C közötti hőmérsékleten keverjük, majd másnapié 0 °C-on állni hagyjuk. Ekkor a dimetilformamidot ledesztilláljuk es a maradékot vízzel eldörzsöljük. A nyers terméket terc-butanol-víz 2:1 elegyből kétszer átkristályosítjuk. 1,35 g (60% ) védett dekapeptidet kapunk. Op.: 216-224 °C. R? =0,20. BOC - Arg(N02)-Pro-NH2 5,12 g (34 mmól) H-Pro-NH2 • HCl-ot 40 ml kloroform és 60 ml dimetilformamid elegyében oldunk, 4,76 ml (34 mmól) trietilamint, 15,0 g 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
