177070. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a BM.123 gamma antibiotikum, alkilezett származékainak előállítására
19 177070 20 oldható húskivonat 30 g dikálium-hidrogénfoszfát 3 g ammóniumszulfát 6g kalciumkarbonát 1 g dikálium-hidrogénfoszfát 6g 5 magnéziumszulfát-heptahidrát 1,5 g kalciumkarbonát 2g glükózx 10 g magnéziumszulfát-heptahidrát 3g víz 10 XA glükózt külön sterilizáljuk. ad 1000 ml glükózx 20 g viz ad XA glükózt külön sterilizáljuk. 1000,ml Az így kapott rendszert steril levegővel 0,4 liter/liter közeg x perc sebességgel levegőztetjük, és 15 240 fordulat/perc sebességgel keveijük. A tenyész-20 25 A fenti összetételű, steril közeghez 5-10% menynyiségû, a fentiekben ismertetett háromszakaszos módszerrel előállított inokulumot adunk. A fermentációt 25—28 °C-on, rendszerint 26 °C-on végezzük. A fermentlevet 0,3-0,5 liter/liter közeg x perc mennyiségű steril levegővel levegőztetjük, és 70—100 fordulat/perc sebességgel keveijük. A fermentációt 65- 90 óra elteltével állítjuk le, és a képződött antibiotikumokat elkülönítjük. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 30 1. példa Inokulum előállítása Az ínokulumkészítés első és második szakaszá- 35 ban növesztő táptalajként a következő összetételű közeget használjuk: 40 Bacto-tripton 5 g élesztőkivonat 5 g marhali úskivonat 3 g glükóz 10g VÍZ ad 1000 ml 45 500 ml ürtartalmú lombikokba 100-100 ml fenti összetételű, steril közeget töltünk, és a lombikokat 50 5 “5 ml fagyasztott vegetatív Nocardia sp. NRRL 8050-inokulummal oltjuk be. A lombikokat forgó rázógépen, erélyes rázás közben 48 órán át 28 °C-on inkubáljuk. Az így kapott inokulummal 20 literes üvegfermentorokba töltött, 12 liter térfo- 55 gatú, a fentieknek megfelelő összetételű steril közegeket oltunk be. Az elegyet steril levegővel végzett levegőztetés közben körülbelül 48 órán át inkubáljuk, majd az így kapott inokulummal 420 literes fermentorokba töltött, 300 liter térfogatú, alábbi 60 összetételű steril közegeket oltunk be: tést 28 C-on, Hodag FD82 kereskedelmi jelű habzásgátló anyag jelenlétében végezzük. 48 óra elteltével a tenyésztést leállítjuk, és az így kapott inokulumot 3000 liter térfogatú fermentációs közeg beoltásához használjuk fel. 2. példa BM123/3 és BM123y antibiotikum előállítása Nocardia sp. fermentációjával Az alábbi összetételű fermentációs közeget használjuk fel: oldható húskivonat 30 g ammóniumszulfát 6g dikálium-hidrogénfoszfát 6g kalciumkarbonát 2g magnéziumszulfát-heptahidrát 3 g glükóz 20 g víz ad 1000 ml oldható húskivonat ammóniumszulfát 15 g 3g 65 A fenti összetételű, azonban glükózt még nem tartalmazó közeget 120°C-os gőzzel 1,4 atmoszféra nyomáson 60 percig sterilizáljuk. A glükózt külön sterilizáljuk. A steril fermentációs közeg pH-ja 6,9. 4000 liter űrtartalmú fermentorba 3000 liter steril, a fentieknek megfelelő összetételű fermentációs közeget mérünk be, a közeget 300 liter, az 1. példában ismertetett módon előállított inokulummal oltjuk be, majd a rendszert 0,35 liter steril levegő/liter közeg x perc sebességű levegőztetés és 70-72 fordulat/perc sebességű keverés közben, 26 °C-on fermentáljuk. A közeghez habzásgátlóként Hodag FD82 kereskedelmi nevű terméket adunk. 67 óra elteltével a fermentációt leállítjuk, és a fermentlevet feldolgozzuk. 3. példa A BM123/1 és BM123y antibiotikum elkülönítése A 2. példában ismertetett módon kapott, 3000 liter térfogatú, 4,3-as pH-jú fermentlevet nátrium-10
