176800. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszforsav és foszfinsavak amino-acil- és peptidil-származékainak előállítására
11 176800 12 b) Az eljárás 28 g (0,057 mól) [(N-benziloxikarbonil-L-alanil-L-alanil)-amino]-metil foszfonsav-benzilaminsót (az a) bekezdés szerint előállított termék) kevés 2 n ammóniumhidroxidban oldunk és az oldatot kationcserélő gyantaoszlopon vezetjük át (B. D. H., a Zerolit 225, SRC 13, RSO3H; 1,5 kg, savas ciklusban frissen regenerált) és vízzel eluáljuk. Összesen 2 liter savas eluátumot gyűjtünk össze, melyet 500 ml-re bepárolunk. Ezután 500 ml metanolt, 5 g 10%-os palládium katalizátort szénhordozón és 0,2 ml jégecetet adunk hozzá. Az elegyet szobahőmérsékleten és atmoszferikus nyomáson hidrogénezzük. A katalizátort leszűrjük és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot 4-szer 250 ml-n-propanollal bepároljuk majd éterrel eldörzsöljük. Fehér szilárd anyag alakjában 12,46 g nyers maradékot kapunk, op.: 200—265 °C (bomlás). A fehér szilárd anyagot 190 ml vízből és 190 ml etanolból 0 °C-on egy éjjelen át való állás közben átkristályosítjuk, majd szűrjük. 8,69 g (L-alanil-L-alanil-amino)-metil-foszfonsavat kapunk, op.: 290—292 °C (bomlás); [afe9=-38,6° (c=l, vízben). 8. példa a) Kiindulási anyag előállítása A 7 a) példában ismertetett eljárással analóg módon N-benziloxikarbonil-L-alanin-N-hidroxi-szukcinimidészterből és (L-alanil-L-alanil-amino)-metil-foszfonsavból kiindulva [(N-benziloxikarbonil-L-alanil-L-alanil-L-alanil)-amino]-metil-foszfonsav-benzilaminsót állítunk elő. Op.: 249—251 °C (bomlás), [a]“ =-32,2° (c=0,5, ecetsavban). b) Az eljárás A 7 b) példában ismertetett eljárással analóg módon [(N-benziloxikarbonil-L-alanil-L-alanil-L-alanil)-amino]-metil-foszfonsav-benzilaminsóból kiindulva (L-alanil-L-alanil-L-alanil-amino)-metil-foszfonsavat állítunk elő. Op. : 323—324 °C (bomlás); [«]d = —78,2° (c=0,5, vízben). 9. példa a) Kiindulási anyag előállítása 2,8 g (0,036 mól) szilárd nátriumkarbonátot 5 °C-on 1,96 g (0,018 mól) (aminometil)-foszfonsavnak 72 ml víz és 36 ml etanol elegyével képezett oldatához adunk; átlátszó oldatot kapunk. Az oldathoz 0 °C-on keverés közben 5,76 g (0,018 mól) N-benziloxikarbonil-L-alanil-N-hidroxi-szukcinimidészter és 36 ml etanol meleg oldatát adjuk, majd 2-szer 10 ml meleg etanollal mossuk. A heterogén elegyet 0 °C-on 2 órán át majd szobahőmérsékleten egy éjjelen át keverjük. Az elegyet bepároljuk, majd az etanol eltávolítása céljából 50 ml vízzel ismét bepároljuk. A maradékot 150 ml vízben oldjuk és 1-szer 150 ml majd 2-szer 30 ml kloroformmal extraháljuk. A vizes réteget 18 ml 2 n sósavval megsavanyítjuk. majd 1-szer 150 ml és 2-szer 30 ml kloroformmal ismét extraháljuk. A vizes fázist elválasztjuk, bepároljuk, a maradékot 10 ml víz és 10 ml 2 n ammóniumhidroxid elegyében felvesszük. Az oldatot kationcserélőgyanta oszlopon átvezetjük (B. D. H. Zerolit 225, SRC 113, RSO3FI; 150 g, savas ciklusban frissen regenerált) és vízzel eluáljuk. Összesen 4-szer 100 ml savas frakciót gyűjtünk össze. Az első két frakciót egyesitjük, bepároljuk, gumiszerű maradékot kapunk, melyet a sósav eltávolítása céljából vízzel ismét bepárolunk. A ragadós szilárd maradékot 1 : 1 arányú éter—dioxán eleggyel kezeljük. 1,8 g fehér szilárd anyagot kapunk, op.: 118—121 °C (bomlás). Az anyalúgok bepárlásakor további 2,02 g szilárd anyagot kapunk, op.: 126—130 °C (bomlás). A második generációt dioxán-éter elegyből átkristályosítva 1,82 g {[(N-benziloxikarbonil-L-alanil) -amino]-metil}-metil-foszfinsavat kapunk, op.: 129— 131 °C (bomlás); [«]“=—26,0° (c=l, vízben). b) Az eljárás 1,5 g (0,005 mól) {[(N-benziloxikarbonil-L-alanil)-amino]-metil}-metil-foszfinsavat 75 ml metanol és 75 ml víz elegyében oldunk. Ezután 0,2 g 5%-os palládium katalizátort szénhordozón, majd 5 csepp jégecetet adunk hozzá. Az elegyet szobahőmérsékleten és atmoszferikus nyomáson hidrogénezzük. A katalizátort leszűrjük és az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot 3-szor 50 ml n-propanollal háromszor ismét bepároljuk. Kb. 0,80 g fehér szilárd maradékot kapunk, mely kb. 146 °C-on bomlás közben olvad. A szilárd anyagot 5 ml metanol és 10 ml aceton elegyéből átkristályosítjuk. 0,63 g [(L-alanil-amino)-metil]-metil-foszfinsavat kapunk. Op.: mintegy 240 °C (bomlás), az anyag higroszkópos, [a]d = +26,9° (c = 1, vízben). 10 példa a) Kiindulási anyag előállítása 14,1 g (0,168 mól) szilárd nátriumkarbonátot 7 g (0,056 mól) (lR,S)-l-aminoetil-foszfonsavnak 280 ml vízzel és 140 ml etanollal képezett oldatához adunk keverés közben 0 °C-on. Az elegyhez 0 °C-on keverés közben 17,9 g (0,056 mól) N-benziloxikarbonil-L-alanin-N-hidroxi-szukcinimidészter és 140 ml meleg etanol oldatát csepegtetjük kb. 15 perc alatt. A kapott oldatot 70 ml etanollal mossuk. A heterogén elegyet 1 órán át 0 °C-on, majd 16 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, az elegy homogénná válik. Az elegyet bepároljuk, majd 200 ml vízzel ismét bepároljuk. A gumiszerü maradékot 500 ml vízben oldjuk. Az oldatot előbb 500 ml, majd 2-szer 250 ml kloroformmal extraháljuk, majd kb. 80 ml 2 n sósavval pH=2-re savanyítjuk és ismét 500 ml, majd 2-szer 250 ml kloroformmal extraháljuk. A vizes réteget bepároljuk és kationcserélő gyanta oszlopon (B. D. H„ Zerolit 225, SRC 13, RSO3H; 750 g, frissen regenerált savas ciklusban) átvezetjük. Az oszlopot vízzel eluáljuk, összesen 6-szor 250 ml frakciót gyűjtünk össze. Az első négy frakciót egyesítjük, bepároljuk, majd a sósav eltávolítása céljából vízzel ismét bepároljuk. Végső maradékként (lR,S)-l-[(N-benziloxikarbonil-L-alanil)-amino]-etil-foszfonsavat kapunk, melyet következőképpen választunk szét : 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
