176623. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kalcitoninszerű új polipeptidek előállítására
15 176623 16 (OBzl>Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2-t, 30 percig keverjük, és vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk és nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. Ezután 18 ml dimetilformamidot adunk hozzá, trietilaminnal a pH-t 7,5-re állítjuk be, majd 100 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 1,54 g BOC-Gln-ONP-t adunk hozzá, és 2 napig szobahőmérsékleten keverjük. A keverés alatt N-metilmorfolin hozzáadásával a pH-t 7,5-nek tartják. Ezután további 0,2 g BOC-Gln-ONP-t adunk hozzá, a pH-t 7,0-ra állítjuk be, és a keverést éjszakán át tovább folytatjuk. A reakció befejeződése után nagy mennyiségű vizet adunk a reakciókeverékhez, mire a termék kiválik. Metanol és dietiléter elegyéből háromszor átkristályosítva 4,8 g (82,9%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 178—182°. Rj=0,67. [aJo = =—15,19° (c=l, dimetilformamidban). 16. BOC-Lys(ClCbz)-Leu-OEt Etilacetátban szuszpendált 7,32 g BOC-Lys(ClCbz)-OH.terc-butilaminsót háromszor 100 ml n sósavval, majd 100 ml vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, és az etilacetátot ledesztilláljuk. A maradékhoz 60 ml diklórmetánt, 2,93 g H-Leu-OEt.HCl-t és 2,0 g 1-hidroxibenzotriazolt adunk, majd — 5°-on hűtés közben 2,75 ml N-etil-N'-dimetilaminopropil-karbodiimidet adunk hozzá, 1 óra hosszat ezen a hőmérsékleten, és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakció befejeződése után a diklórmetánt vákuumban ledesztilláljuk, és a maradékot 150 ml etilacetátban feloldjuk. Az oldatot n sósavval, 5%-os vizes nátriumhidrogén-karbonát oldattal és végül vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályosítva 6,4 g (76,6% kitermeléssel) BOC-Lys(ClCbz)-Leu-OEt-t kapunk. Olvadáspontja 76—97°. 17. BOC-Lys(Clbz)-Leu-OH 6,13 g BOC-Lys(Clbz)-Leu-OEt 20 ml etilacetáttal készült oldatához 0°-on hozzáadunk 12,1 ml n-nátriumhidroxid-oldatot. Két óra hosszat szobahőmérsékleten való keverés után további 1,1 ml n-nátriumhidroxid-oldatot adunk hozzá, 1 óra hosszat tovább keverjük, majd a pH-t 7-re állítjuk be, és a reakciókeveréket vákuumban bepároljuk. A maradékot dietiléterrel mossuk, a vizes réteg pH-ját 3-ra állítjuk be, és háromszor 100 ml etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos réteget 100 ml vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékot 50 ml dietiléterben oldva, csökkentett nyomáson bepárolva és szárítva, 5,85 g por alakjában BOC-Lys(ClCbz)-Leu-OH-t kapunk. Olvadáspontja 46—60° fölött van. [«Jó9= — 10,68° (g—1, dimetilformamidban). 18. BOC-Leu-His-OH 3,83 g H-His-OH.HCl-t melegítés közben 25 ml vízben oldunk, majd szobahőmérsékletre hűtjük, és 1,84 g nátriumhidrogénkarbonátot, majd 270 mg 1 -hidroxíbenzotriazolt, 8,5 g BOC-Leu-OSU-t és 25 ml tetrahidrofuránt, végül 10 ml vizet adunk hozzá, és éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. A reakciókeverék pH-ját ezután nátriumhidrogén-karbonát-oldattal 7-re állítjuk be, és 1,3 g BOC-Leu-OSU-t adunk hozzá, 6 óra hosszat keverjük, majd további 1,3 g BOC-Leu-OSU-t adunk hozzá, és a keverést éjszakán át tovább folytatjuk. A reakció befejeződését vékonyrétegkromatografálással ellenőrizzük, és a reakciókeverékből az oldószert vákuumdesztillációval eltávolítva a visszamaradt vizes réteget etilacetáttal mossuk. A vizes réteg pH-ját 5-re állítjuk be, és HP—20 gyantával töltött, 2,3 cmxl8 cm méretű oszlop tetejére öntjük, majd az oszlopot vízzel addig mossuk, amíg a vizes eluátum ninhidrinnek negatív reakciót nem mutat. Ezután metanollal eluálunk, az eluátumot vákuumban bepároljuk és a maradékhoz dietilétert adunk. A keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk, majd kétszer metanol és dietiléter elegyével újra leválasztva és szárítva 3,94 g (53,5%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspontja 178—180°. [«Jd=— 0,19° (c=l, dimetilformamidban). 19. BOC-Leu-Ser(Bzl)-OH 11,7 g H-Ser(Bzl)-OH 50 ml vízzel készült oldatához hozzáadunk 10,1 g nátriumhidrogénkarbonátot és 10 ml dioxánt, majd 15 ml dioxán és 5 ml dimetilformamid elegyében oldott 16,4 g BOC-Leu-OSU-t. A reakciókeveréket éjszakán át keverjük, majd pH-ját 7-re állítjuk be, és a szerves oldószereket vákuumdesztillációval eltávolítjuk. A vizes réteget 100 ml etilacetáttal kirázzuL és a szerves réteget kétszer n sósavval, majd vízzel mossuk. A szerves réteget vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, vákuumban bepároljuk, és a maradékot etilacetát és n-hexán elegyéből kétszer átkristályosítva 16,1 g (78,8%) BOC-Leu-Ser(Bzl)-OH-t kapunk. Olvadáspontja 82—86°. 20. BOC-Lys(ClCbz)-Leu-Ser(Bzl)-OH 4,1 g (10 mmól) BOC-Leu-Ser(Bzl)-OH-t —5°-on hűtve hozzáadjuk 25 ml trifluorecetsavhoz, az oldatot 25 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és a kivált terméket vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk. A kapott kristályokat 8 ml dimetilformamidban oldjuk, az oldathoz 8 g BOC-Lys(ClCbz)-ONP-t és 270 mg 1-hidroxibenzotriazolt adunk, a pH-t N-metilforfolinnal 8-ra állítjuk be, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a reakciókeverékhez n sósavat adunk, a kivált csapadékot kloroformban oldjuk, és az oldatot háromszor n sósavval, háromszor 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és háromszor vízzel mossuk. A kloroformos réteget vízmentes magnéziumszulfáton szárítva, vákuumban bepároljuk. A maradékot háromszor etilacetát és n-hexán elegyéből, majd háromszor 1-dietiléter és n-hexán elegyéből átkristályosítjufc A kapott terméket 180 g kovasavgélt tartalmazó oszlopon kromatografáljuk, 2:1 arányú etilacetát és benzol elegyével mossuk, és metanollal eluáljuk. A metanolos eluátumot vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályositva 5,25 g (74,5%) BOC-Lys(ClCbz)-Leu-Ser(Bzl)-OH-t kapunk. Olvadáspontja 84—100° (bomlik). Vékonyrétegkromatografálás&al egyetlen foltot ad. Aminosav-összetétel: Lys 0,98 (1); Leu 1,00(1); Ser 0,82 (1). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
