176623. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kalcitoninszerű új polipeptidek előállítására
17 176623 18 21. BOC-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 7,65 g BOC-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2-t —5°-on 35 ml trifluorecetsavban oldjuk, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és a csapadékként kapott terméket vákuumban nátriumhidroxidpn szárítjuk, majd 25 ml dimetilformamidban feloldjuk. Ehhez az oldathoz —5°-on hozzáadunk 600 mg 1-hidroxibenzotriazolt, 2,35 g BOC-Lys(ClCbz)-Leu-OH-t és 0,69 ml N-etil-N'-dimetilaminopropil-karbodiimidet, 1 óra hosszat —5°on, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakciókeverékhez n sósavat adva a termék kiválik. Kétszer metanol és dietiléter elegyéből átkristályősítva és szárítva 8,0 g (87,3%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 164° fölött van (bomlik). [oc]d=—18,65° (c= 1, dimetilformamidban). 22. BOC-Leu-His-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl-Pro-NH2 7,68 g BOC-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-NH2-t —5°-on 35 ml trifluorecetsavban feloldunk, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 20 ml dimetilformamidban oldjuk, az oldat pH-ját trietilaminnal 5-re állítjuk be, — 5°-on hozzáadunk 430 mg N-hidroxiszukcinilimidet, 1,37 g BOC-Leu-His-OH-t és 58 ml N-etil-N'-dimetilaminopropil-karbodiimidet, majd 1 óra hosszat ezen a hőmérmérsékleten és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakciókeverékhez n sósavat adunk, és a kivált csapadékot metanol és dietiléter elegyéből, és dimetilformamid és dietiléter elegyéből ismételten leválasztjuk. A terméket szárítva, 8,30 g (98,2%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 167—175°. [a]Jj5= —17,45° (e= 1, dimetilformamidban). 23. BOC-Glu(OBzl)-Leu-His-Lys(QCBz)-Leu-Gln-Thr-(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp-(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 7,64 g BOC-Leu-His-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2heptadekapeptidamidot —5°-on 35 ml trifluorecetsavban feloldjuk, 40 percig keverjük, és vákuumban bepároljuk. A maradékot 30 ml dimetilformamidban feloldjuk, az oldat pH-ját N-metií~ morfolinnal 7-re állítjuk be, majd hozzáadunk 70 g 1- -hidroxibenzotriazolt és 1,82 g BOC-Glu(OBzl)-OSU-t, majd a pH-t N-metilmorfolinnal újra 7-re állítjuk be. A reakciókeveréket 2 napig szobahőmérsékleten keverjük, majd n sósavat adunk hozzá. A kivált csapadékot metanol és dietiléter elegyéből kétszer átkristályosítva és szárítva 7,55 g (92,5%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 161—169° (bomlik). Aminosav-összetétel: His 0,83 (1); Arg 1,05 (1); Asp 1,08 (1); Thr (2,52 (3); Glu 2,06 (2); Pro 2,16 (2); Gly 2,00 (2); Ala 1,06 (1); Val 1,10 (1); Leu 1,82 (2); Tyr 0,73(1); Lys 0,94(1). 24. BOC-Gln-Glu(OBzl)-Leu-His-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 7,29 g BOC-Glu(OBzl)-Leu-His-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 oktadekapeptidamidot — 5°-on feloldunk 30 ml trifluorecetsavban, 45 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 15 ml dimetilformamidban feloldjuk, az oldat pH- ját N-metilmorfolinnal 7-re állítjuk be, majd hozzáadunk 100 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 1,4 g BOC-Gln-ONP-t és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakciókeverékhez ezután n sósavat adunk, a keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk és vízzel mossuk. Az átkristályosítást háromszor megismételve szárítás után 7,00 g (91,5%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 171—175° (bomlás közben). 25. BOC-Lys(ClCbz)-Leu-Ser(Bzl)-Gln-Glu(OBzl)-Leu-Hís-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 6,70 g BOC-Gln-Glu(OBzl)-Leu-His-Lys(ClCbz)-Leu-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 nonadekapeptidamidot — 5°-on feloldunk 30 ml trifluorecetsavban, hozzáadunk 2,2 ml 4 n sósav-dioxán-elegyet és 45 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, a kapott csapadékot dietiléterrel alaposan mossuk és nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. Az így kapott terméket 15 ml dimetilformamidban feloldjuk, az oldat pH-ját N-metilmorfolinnal 5,5—6-ra állítjuk be, hozzáadunk 360 mg 1-hidroxibenzotriazolt, 1,86 g BOC-Lys(ClCbz)-Leu-Ser(Bzl)-OH-t és 5 ml dimetilformamidban oldott 540 mg diciklohexil-karbodiimidet, 1 óra hosszat keverjük, majd a keverést éjszakán át tovább folytatjuk. Ezután a reakciókeverékhez n sósavat adunk, és a kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk. A kapott csapadéknak etanolban oldhatatlan részét és a szüredékből dietiléter hozzáadására kinyert csapadékot egyesítjük, metanol és dietiléter elegyét adjuk hozzá, és a csapadékot metanol és dietiléter elegyéből ismételten átkristályosítva 7,0 g (87,6%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 171—177° (bomlik). Md = ■" 18,45° (c=l, dimetilformamidban). Aminosav-összetétel: Lys 1,86 (2), His 0,74 (1), Arg 0,97 (1), Asp 1,04 (1), Thr 2,55 (3), Ser 0,53 (1), Glu 2,85 (3), Pro 2,08 (2), Gly 2,00 (2), Alá 1,04 (1), Val 1,04 (1), Leu 2,67 (3), Tyr 0,67 (1). 1-----------------------(0-I2)5..............................r ! I A -CO-Ser(Bzl)-Asn-Leu-Ser(Bzl)-Thr(Bzl)-NHCHCO-Val-Leu-Gly-OH 1—9. aminosav-szekvenciát a következő módon állítjuk elő : (CH2)5COOH I 26. BOC-Thr(Bz!)-HN-CH-COOCH3 (CH2)5COOH I 56 g olajos Cbz-HNCH-COOCH3-t feloldunk 300 ml 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
