176623. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kalcitoninszerű új polipeptidek előállítására
13 176623 14 bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és a kivált csapadékot vákuumban nátriumhidroxidon szárítjuk. Ehhez a termékhez 25 ml dimetilformamidot adunk, és —5°-on trietilaminnal a pH-t 5,0-ra állítjuk be. Hozzáadunk 972 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 3,2 g AOC-Arg(Tos)-OH-t, majd —5°-on való hűtés közben 1,3 ml N-etil-N'-dimetilaminopropil-karbodiimidet csepegtetünk hozzá, és utána 1 óra hosszat —5°-on és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakciókeverékhez etilacetátot adunk és a keletkezett csapadékot 400 ml metanol és 50 ml dietiléter forró elegyével, majd 300 ml metanol és 100 ml dietiléter elegyével kezeljük. 7,0 g (82,7%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 187—193° (bomlik). Vékonyrétegkromatográfiával a 3. és 6. oldószerrendszereket használva egyetlen foltot kapunk. Rf=0,42. Aminosav-összetétel : NH3 1,28; Arg 0,95 (1); Asp 1,04 (1); Thr 1,50 (2); Pro 0,98 (1); Gly 1,84 (2); Ala 1,00 (l);Val 1,01(1). 11. BOC-Tyr(Bzl)-Pro-OBzl 37,6 g BOC-Tyr(Bzl). OH. CHA-t 300 ml etilacetáttal és 120 ml n sósavval összekeverünk, a rétegeket elválasztjuk,, és az etilacetátos réteget háromszor vízzel mossuk. A szerves réteget vízmentes nátriumszulfáton szárítva vákuumban bepároljuk, az olajos maradékot 80 ml diklórmetánban feloldjuk, és hozzáadunk 19,3 g H-Pro-OBzl.HCl-t. Ehhez a reakciókeverékhez — 5°-on hűtés közben 14,6 ml N-etil-N'-dimetilaminopropil-karbodiimidet adunk, majd — 5°-on 1 óra hosszat és szobahőmérsékleten éjszakán át keverjük. A reakciókeveréket vákuumban bepároljuk, és a maradékot 800 ml etilacetáttal és 400 ml n sósavval kirázzuk, és az etilacetátos réteget elválasztjuk. A szerves réteget egymás után kétszer 300 ml n sósavval, kétszer 300 ml vízzel, háromszor 300 ml 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és kétszer 300 ml vízzel mossuk. A szerves réteget nátriumkarbonáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékként kapott nyers terméket 400 g kovasavgéllel töltött oszlopon kromatografáljuk, 4:1 arányú kloroform—etilacetát eleggyel eluáljuk, és az eluátumot vékonyrétegkromatografálással azonosítjuk. 43 g olajos BOC-Tyr(Bzl)-Pro-OBzl-t kapunk. Rj=0,88. 12. BOC-THr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-OBzl 20 g BOC-Tyr(Bzl)-Pro-OBzl-hez —5°-on hűtés közben hozzáadunk 50 ml trifluorecetsavat, és —5°-on 10 percig és szobahőmérsékleten 50 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. Az olajos maradékot éjszakán át nátriumhidroxidon szárítjuk, majd 30 ml dimetilformamidot adunk hozzá, és —5°-on trietilamin hozzáadásával a pH-t 7,5-re állítjuk be. Ezután 470 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 14,2 BOC-Thr(Bzl)-OSU-t adunk hozzá, és további 1 óra hosszat —5°-on és szobahőmérsékleten éjszakán át keverjük. A keverés alatt a reakciókeverék pH-ját N-metilmorfolin hozzáadásával 7-en tartjuk. Két nap múlva 1 ml dimetilaminopropilamint adunk hozzá, és további 2 óra hosszat keveijük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 500 ml vízzel és 500 nű etilacetáttal kirázzuk, és az etilacetátos réteget elválasztjuk. A vizes réteget 200 ml etilacetáttal újra extraháljuk. Az etilacetátos rétegeket egyesítve, egymás után háromszor n sósavval, háromszor vízzel és háromszor 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal mossuk, majd vízmentes magnéziumszulfáton szárítás után a szerves réteget vákuumban bepároljuk.-A maradékot dietiléter és n-hexán elegyéből átkristályosítva, 19,6 g nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket ugyanilyen oldószerből újra átkristályosítva 14,4 g (54,9%) cím szerinti vegyületet kapunk. Rf=0,67. 13. BOC-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-OH 30 ml tetrahidrofuránban feloldunk 14,2 g BOC-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-OBzl-t, és —5°-on 15 perc alatt hozzácsepegtetünk 23 ml n nátriumhidroxid-oldatot, majd szobahőmérsékleten 4 óra hosszat keverjük. Az oldat pH-ját n sósavval 7-re állítjuk be, és a tetrahidrofuránt vákuumban ledesztilláljuk. A visszamaradt oldathoz vizet adunk, dietiléterrel mossuk, és a vizes réteg pH-ját n sósavval 2-re állítjuk be, majd kétszer etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatot vízzel mossuk, vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékot dietiléter és n-hexán elegyéből átkristályosítva 12 g nyers terméket kapunk. Ezt a nyers terméket etilacetátban feloldjuk, dietilétert adunk hozzá, az oldatot állni hagyjuk, és közben fokozatosan n-hexánt adunk hozzá. 10,5 g (84%) BOC-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-OH-t kapunk. Olvadáspontja 134—136°. Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. RJ=0,68; Rf=0,63. 14. BOC-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg-Tos-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 6,0 g AOC-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2-t —5°-on hozzáadunk 20 ml trifluorecetsavhoz, 30 percig keverjük és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. Ezután 20 ml dimetilformamidot adunk hozzá, a pH-t trietilamin hozzáadásával — 5°-on 4,5-re állítjuk be, és a reakciókeveréket ezen a hőmérsékleten tartva, 851 mg 1-hidroxibenzotriazolt, 4,2 g BOC-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-OH-t adunk hozzá, majd hozzácsepegtetünk 1,2 ml N-etil-N'-dimetilaminopropil-karbodiimidet, és a keverést —5°-on 1 óra hosszat és szobahőmérsékleten éjszakán át tovább folytatjuk. A reakciőkeverékhez 300 ml metanolt és 100 ml dietilétert adunk, a keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk, és metanol és dietiléter elegyéből, majd dimetilformamid és dietiléter elegyéből és végül metanol és dietiléter elegyéből összesen háromszor átkristályosítjuk. 5,8 g (71,3%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 186,5—190° (bomlik). Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk (3. és 6. oldószerrendszerekkel). [<z]d = —15,86° (c=l, dimetilformamidban). Aminosav-összetétel: NH3 1,60; Arg 0,92 (1); Asp 1,04 (1); Thr 2,1 (3); Pro 2,08 (2); Gly 1,86 (2); Val 1,00 (1); Tyr 0,91 (1). 15. BOC-Gln-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Tfar(Bzl)-Pro-NH2 20 ml trifluorecetsavhoz —5°-on hozzáadunk 5,4 g BOC-Thr(Bzl)-Tyr(Bzl)-Pro-ArgCTos)-Thr(Bzl)-Âsp-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
