176623. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kalcitoninszerű új polipeptidek előállítására
176623 12 Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. R|=0,29 ; Rf=0,52. 5. BOC-Val-Gly-OEt 1 liter etilacetáthoz hozzáadunk 219,2 g BOC-Val-OH-DCHA-t. A kapott oldatot kétszer 600 ml n sósavval, majd 500 ml vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A kapott maradékhoz 100 ml tetrahidrofuránt és 400 ml diklórmetánt, majd — 5°-on hűtve 69,8 g H-Gly-OEt.HCl-t, 70 ml trietilamint és 103,2 g diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá és —5°-on 1 óra hosszat, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a reakciókeverékhez 10 ml ecetsavat adunk, 1 óra hosszat keverjük, majd szűrjük. A szüredéket egymás után kétszer 500 ml n sósavval, kétszer 500 ml, 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal, majd vízzel mossuk. Vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A kapott maradékot etilacetát és n-hexán elegyéből háromszor átkristályosítva 105,4 g (69,7%) BOC-Val-Gly-OEt-t kapunk. Olvadáspontja 95—96°. 6. BOC-Val-Gly-OH 150 ml metanolban feloldunk 96,8 g BOC-Val-Gly-OEt-t, majd —5°-on hozzáadunk 368 ml n nátriumhidroxid-oldatot, és a reakciókeveréket 1 óra hosszat keverjük. ApH-t n sósavval 8,0-ra állítjuk be, a metanolt vákuumban ledesztilláljuk, és a vizes réteget 100 ml dietiléterrel mossuk. A vizes réteg pH-ját n sósavval 2,0- ra állítjuk be, és négyszer 200 ml etilacetáttal extraháljuk. Az etilacetátos kivonatot vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz n-hexánt adva és etilacetát és n-hexán elegyéből átkristályosítva 85,5 g (97,4%) BOC-Val-Gly-OH-t kapunk. Olvadáspontja 112—117° (bomlik). Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. Rj=0,35. 7. BOC-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 35 ml trifluorecetsavhoz —5°-on hozzáadunk 10,5 g BOC-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2-t, 30 percig kevetjük, és vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, a keletkezett csapadékot szűréssel elválasztjuk, és vákuumban nátriumhidroxidon szárítva H-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2.TFA-t kapunk. Ehhez a termékhez .100 ml tetrahidrofuránt és — 5°-on trietilamint adva, pH-ját 5,0-re állítjuk be, és ezután 5,49 g BOC-Val-Gly-OH-t és 2,66 g 1-hidroxibenzotriazolt adunk hozzá. Ezt a reakciókeveréket — 5°-on hűtjük, hozzácsepegtetünk 3,61 ml N-etil-N'-dimetilaminopropil-karbodiimidet, és —5°-on 1 óra hosszat, majd szobahőmérsékleten éjszakán át keverjük. Vákuumban való bepárlás után a kapott maradékot 300 ml kloroformban oldjuk, az oldatot egymás után kétszer nátriumkloriddal telített 200 ml n sósavval, kétszer nátriumkloriddal telített 200 ml 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és 75 ml telített nátriumklorid-oldattal mossuk. Vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, és a szerves réteget vákuumban bepároljuk. A maradékot metanol és dietiléter elegyéből átkristályosítva 12,0 g (88,3%) BOC-Val-Gly-AIa-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2-t kapunk. Olvadáspontja 121—135° 11 (bomlik). Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk (6. oldószerrendszerrel). [«]®=-10,30° (c=l, dimetilformamidban). 8. BOC-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 33,1 g BOC-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2-hoz —5°-on hozzáadunk 100 ml trifluorecetsavat, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és a kapott csapadékot nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. Hozzáadunk 80 ml dimetilformamidot, és trietilamin hozzáadásával a pH-t 7,5-re állítjuk be. Ezután a reakciókeverékhez 950 ml 1-hidroxibenzotriazolt és 30,2 g BOC-Asp(OBzl)-OSU-t adunk. N-metilmorfolin hozzáadásával a pH-t 7,5-re állítjuk be, 2 napig keverjük, és a keverés során a pH-t N-metilmorfolin hozzáadásával 7,5-en tartjuk. Ezután újra 2,0 g BOC-Asp(OBzl)-OSU-t adunk hozzá, a pH-t N-metilmorfolinnal 7-re állítjuk be, és éjjelen át keverjük. Ezután a reakciókeverékhez nagy mennyiségű vizet adunk, a kivált ragadós anyagot dekantálással elválasztjuk és dietiléterrel eldörzsöljük, mire az anyag kristályosán kiválik. A vizes réteget kloroformmal extraháljuk, és a kivonatot vákuumban bepároljuk, a maradékhoz vizet adunk, hogy a gumiszerű anyag kicsapódjék-. Ez a gumiszerű anyag dietiléterrel eldörzsölve kristályosán kiválik. Az egyesített szilárd termékeket metanol és dietiléter elegyéből négyszer átkristályosítva, majd forró etilacetát-dietiléter eleggyel mosva és szárítva 34,2 g (79,6%) cím szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 195—199°. Vékonyrétegkromatografálással egyetlen foltot kapunk. R?=0,46. [«]£*=-18,27° (c=l, dimetilformamidban). 9. BOC-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2 7,2 g BOC-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2-höz —5°-on hozzáadunk 30 ml trifluorecetsavat, 30 percig keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékhoz dietilétert adunk, és a kivált csapadékot nátriumhidroxidon vákuumban szárítjuk. Az így kapott termékhez 15 ml dimetilformamídot adunk, és a pH-t trietilamin hozzáadásával 7,5-re állítjuk be. Ezután 100 mg 1-hidroxibenzotriazolt és 4,0 g BOC-Thr(Bzl)-OSU-t adunk hozzá, a pH-t N-metilmorfolinnal helyesbítjük, és 2 napig szobahőmérsékleten keverünk. A pH-t 3 ml dimetilformamiddal és N-metilmorfolinnal 7,5-re újra beállítjuk, majd éjszakán át tovább keverjük. A reakció befejeződése után a reakciókeverékhez nagy mennyiségű vizet adunk, a kivált csapadékot szűréssel elválasztjuk, és metanol és dietiléter elegyéből háromszor átkristályosítva 6,7 g (77,1%) dm szerinti vegyületet kapunk. Olvadáspontja 172—188°. Vékonyrétegkromatográfiával a 3. és 6. oldószerrendszerek használatával egyetlen foltot kapunk. Mg*= — 13,65° (c=l, dimetilformamidban). 10. AOC-Arg(TOS)-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)~Pro-NH2. 6,52 g BOC-Thr(Bzl)-Asp(OBzl)-Val-Gly-Ala-Gly-Thr(Bzl)-Pro-NH2-höz — 5°-on hozzáadunk 20 ml trifluorecetsavat, 30 percig keverjük, majd vákuumban 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
