176356. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3',4'-didezoxi-kanamicin B származékok előállítására
15 176356 16 CM-Sephadex C-25-tel töltött oszlopra (Pharmacia Co. Svédország) visszük fel. 30 ml vízzel mossuk az oszlopot, majd 0,03 normáltól 0,3 normálig változó töménységű ammónium-hidroxid-oldattal gradiens elúciót végzünk. Az oszlopról lecsepegő folyadékot frakciókban gyűjtjük, az aktív frakciókat egyesítjük, és ledesztillájuk róluk az oldószert. Ily módon 10 mg 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-monokarbonátot nyerünk. A monokarbonát keletkezése azzal magyarázható, hogy a termék széndioxidot vesz fel a levegőből. Vékonyrétegkromatográfiás úton vizsgálva a termék szilikagél lemezen és n-butanol : etanol : kloroform: 17%-os ammónium-hidroxid oldat 4 :4 :2 :3 elegy ében futtatva 0,19-es Rf-értéknél jelenik meg. Ez a 0,19-es Rf-érték azonos az autentikus 3’,4’-didezoxi-kanamicin B mintáéval. Az ily módon nyert termék antibakteriális spektruma ugyancsak megegyezik a 3\4’-didezoxi-kanamicin B-ével. 5. példa A 4. példában leírt módon eljárva, de az ott felhasznált kiindulási anyag helyett 21,9 mg, az 1. példa 9. pontjában leírt módon nyert 2’-0-benzil-szulfonil-penta-N-tozil-3’,4’-didezoxi-kanamicin B-ből kiindulva, és oldószerként 2 ml cseppfolyós ammóniát használva színtelen, szilárd halmazállapotú anyag formájában 80 mg 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-monokarbonátot nyerünk, amelynek vékonyrétegkromatográfiás Rf-értéke és antibakteriális spektruma azonos az autentikus mintáéval. 6. példa 2,5ml etil-amin és 3 ml cseppfolyós ammónia kb. -30 °C hőmérsékletre hűtött elegyében feloldunk 32 mg 2”-0-benzil-szulfonil-penta-N-tozil-3’,4’-didezoxi-kanamicin B-t, majd kb. 10 mg fém nátriumot adunk az oldathoz. Kevertetés közben kissé megmelegítjük az elegyet, hogy a nátrium fokozatosan feloldódjon, ily módon a reakció nagyon simán játszódik le. 3 óra múlva az oldószer eltávolítása céljából felmelegítjük az elegyet, és vízben feloldjuk a maradékot. P-Toluol-szulfonsawal semlegesítjük az oldatot, majd ledesztilláljuk róla az oldószert. Jól megszárítjuk a nyert, szilárd halmazállapotú maradékot, majd dimetil-formamiddal kb. 50 °C hőmérsékleten háromszor kivonatoljuk. Az ily módon lényegében sómentesített anyagot egy CM-Sephadex C-25-tel töltött oszlopra visszük fel, vízzel kimossuk az oszlopot, majd 0,03 normáltól 0,3 normálig változó töménységű ammónium-hidroxid-oldattal gradiens elúciót végzünk. Frakciókban gyűjtjük az elutumot, egyesítjük az aktív frakciókat, ledesztilláljuk róluk az oldószert, ily módon 11,5 mg 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-monokarbonátot nyerünk. A 6. példában leírt módon eljárva, 31,7 mg 2 ”-0 -benzil-szűlfonil-penta-N-tozil- 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-t 0 °C hőmérsékleten 4 ml etil-aminban feloldva, és az oldathoz kb. 10 mg fém lítiumot adva 11 mg 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-monokarbonátot nyerünk. 7. példa 8. példa A 6. példában leírt módon eljárva, 31,3 mg 2”-0-benzil-szulfonil-penta-N-tozil- 3 ’,4’-didezoxi-kanamicin B-t 0 °C hőmérsékleten 4 ml etil-aminban feloldva, és az oldathoz kb. 10 mg fém káliumot adva 10,8 mg 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-monokarbonátot nyerünk. 9. példa a) A 4. példában leírt módon eljárva, 25 mg pe nta-N-benzil-szulfonil- 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-ből kiindulva 8,5 mg, a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatokban és antibakteriális spektrumát tekintve az autentikus 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-vel azonos 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-monokarbonátot nyerünk. b) A 2. példa 3. és 4. pontjában leírt módon eljárva, penta-N-benzil-szulfonil- 3’,4’-di-0-benzil-szulfonil-4”,6”-0-ciklohexilidén-kanamicin B-nek és penta-N-benzil-szulfonil-3’,4’,2”-tri-0-benzil-szulfonil- 4”,6”-0-ciklohexilidén-kanamicin B-nek a 2. példa 2. pontjában leírt módon nyert nyers, tehát oszlop-kromatográfiás úton szét nem választott, 1,53 g-nyi mennyiségű keverékéből a penta-N-benzil-szulfonil-3’,4’-didezoxi-kanamicin B és a penta-N-benzil-szulfonil-2”-0-benzil-szulfonil-3’,4’-didezoxi-kanamicin B 0,88 g-nyi mennyiségű keverékéhez jutunk. Ezen keverékből, a fenti a) pont alatt leírt módon 0,31 g 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-monokarbonátot nyerünk. 10. példa 30 ml etil-aminban feloldjuk penta-N-benzil-szulfonil-3 ’,4’-didezoxi-kanamicin B-nek és penta-N-benzil-szulfonil-2” -O-benzil-szulfonil -3’,4’-didezoxi-kanamicin B-nek a 9. példában említett, 620 mg-nyi mennyiségű keverékét, majd lassan fél lítiumot adagolunk az oldathoz. A továbbiakban a 7. példában leírt módon eljárva 229 mg 3’,4’-didezoxi-kanamicin B-monokarbonátot nyerünk. 11. példa A 4. példában leírt módon eljárva, 27,7 mg, a 3. példa 3. pontjában leírt módon nyert penta-N-mezil-2”-0-mezil-kanamicin B-t —60 °C hőmérsékleten 5 ml cseppfolyós ammóniában feloldva, 13,7 mg, a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
