176294. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antigének és antitestek meghatározására
25 176294 26 A IX. táblázatban összefoglalt értékeket kettős logaritmusos beosztással ellátott papíron ábrázoljuk. A standard fíbrinogén-oldat koncentrációját az abszcisszára, a 0,5-es extinkció-érték eléréshez szükséges időt pedig az ordinátára visszük fel. Az így kapott kalibrációs görbe, amint az a 9. ábrán látható, egyenes vonal. Ezután egy L-alakú keverőbottal felszerelt, 2 mm széles, üvegből készült abszorpciós küvettába bemérünk 0,3 ml mennyiséget valamilyen, különböző betegektől nyert ismeretlen mintából (vizelet, Szérum vagy mellhártyatéri folyadék), hozzáadunk 0,1 ml mennyiséget a fentebb említett, antifibrinogénnel érzékenyített latex reagensből, és a reakcióelegyet a fentebb leírt módon keverjük, miközben 5 1,2 mikrométer hullámhosszúságú fénnyel világítjuk meg. Mérjük azt az időt, amely ahhoz szükséges, hogy az extinkció értéke 0,5 legyen. A fentiek szerint felállított kalibrációs görbéről leolvassuk az ehhez az időértékhez tartozó fibrinogén-koncent- 10 rációt. A kapott eredményeket a X. táblázatban tüntetjük fel. X. Táblázat Beteg Ismeretlen minta 0,5-es extinkció-érték Fibrinogén-koncentráció az ismeretlen mintában mikrogramm/ml száma típusa hígítása eléréséhez szükséges találmány radioimmunidő, sec szerinti eljárás-vizsgálati módszer 1. Vizelet X 1 2. Rákos mellhártyatéri folyadék X 50 3. Szérum X 1 4. Szérum X 1 5. Szérum X 1 6. Szérum X 1 7. példa (1) Oxitocinnal érzékenyített latex-reagens előállítása 40 0,1 N vizes ecetsav-oldattal készült, 220 NE/ml koncentrációjú oxitocin-oldat 1 ml mennyiségét 0,5 ml polisztirol-latexszel (átlagos részecskemérete 0,481 mikrométer, ..szUárdanyag-tartalma 10 súly%, 45 gyártó Dow Chemical Co.) elegyítjük. Az elegy et 2 órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd pedig 20 percig centrifugáljuk 2—4°C-on 12000/perc fordulatszámmal. A csapadékot dekantálással leválasztjuk, és a kapott, oxitocinnal érzékenyített latex-ré- 50 szecskákét 0,2 súly% marhaszérum-albumint tartalmazó 4 ml etilén-diamin-tetraecetsav/glicin pufferoldatban diszpergáljuk. Oxitocinnal érzékenyített latex-reagenst kapunk, amely 1 súly% latexet tartalmaz. 55 (2) Az oxitocin-antiszérum optimáÜs koncentrációjának meghatározása A fenti (1) pont szerint készített, oxitocinnal 60 érzékenyített latex-reagens 0,1 ml alikvot részét 0,1 ml fiziológiás nátriumklorid-oldattal és 0,2 ml oxitocin-antiszérummal elegyítjük, amelyet a XI. táblázatban megadott mértékben hígítottunk fiziológiás nátriumklorid-oldattal. Az elegyet percenként 65 9,2 4,5 5,117 11 195 197,4 25 2,1 2,210 20 2,5 2,302 3,8 8,6 9,020 12 3,7 3,723 200 rázatással 12 percig keverjük, majd meghatározzuk az extinkcióját 1,2 mikrométer hullámhosszúságú fény alkalmazásával az 1. példa (2) pontjában ismertetett módon. A kapott eredményeket a XI. táblázatban mutatjuk be. XI. Táblázat Az oxitocin-antiszérum hígítása Extinkció 1,2 mikrométernél X 20 1,175 X 30 0,618 X 40 0,393 X 50 0,327 X 80 0,220 X 100 0,162 A XI. táblázatban feltüntetett számértékekből kitűnik, hogy az oxitocin-antiszérum optimális koncentrációja körülbelül 30-szoros hígításnál van. 13
