176265. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, baktériumellenes piperazino-kinolin-karbonsav, sói és hidrátjai előállítására
7 176265 8 Az I képletü vegyület preventív hatása Pseudomonas aeruginosával egérben végzett 5 szisztémás fertőzés ellen Hím egereket (ddY törzs, 6-hetesek, testsúlyuk 28-33 g) szisztémásán megfertőztünk úgy, hogy az egereket intraperitoneálisan beoltottuk Pseudomo- jq nas aeruginosa HD 1210-nek 0,5 ml agy-szív-levessel (Eiken) készített, 5% mucint tartalmazó szuszpenziójával. Az I képletü vegyületet és a pipemidinsavat 0,5%-os karboximetilcellulóz-oldatban szuszpendáltuk, illetve a karbenicillint vízben oldottuk. 15 Valamennyi kísérleti anyagot kétszer adtuk be az egereknek közvetlenül a fertőző oltás után, majd 6 órával később és valamennyi vegyület terápiás hatá2. kísérlet sát a túlélők arányából állapítottuk meg. A vegyületek hatásosságát az 50%-ban hatásos dózis (EDS0) alapján hasonlítottuk össze, amit mintaanalízissel [Miller L.C. and M.L. Tainter: Estimation of the ED50 and its error by means of logarithmic-probit graph paper, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 57, 261-264 (1944)], és 95%-os megbízhatósági határral, amit Iithcield és Wilcoxon módszerével [Litchfield J.T. and F. Wilcoxon: A simplified method of evaluating dose-effect, J. Pharmacol. 92, 99—113 (1948)] számítottunk ki. Amint az a 2. táblázatból látható, a 2. példa szerint előállított vegyület hatásosan megvédi az egereket a Pseudomonas aeruginosa fertőzéstől, és bebizonyosodott, hogy hatásosabb, mint a pipemidinsav és a karbenicillin. Az I képletü -vegyület LD10 értéke több mint 4 g/kg egérben és az LD10/EDg0 értéke 21,6 felett van, ami igen biztonságos határ. 2. táblázat Az I képletü vegyület preventív hatása Pseudomonas aeruginosa-val egérben végzett szisztémás fertőzés ellen Vegyület Kiváltó dózis EDS0 (mg/kg) ED90 (mg/kg) (csíraszám/egér) (95%-os megbízhatósági határ) I vegyület 3,5 x 104 Pipemidinsav 3,5 x 104 Karbenicillin 3,5 x 104 Az I vegyületet és a pipemidinsavat orálisan a karbenicillint szubkután adtuk be. 3. kísérlet Az I képletü vegyület preventív hatása egérben Escherichia coli-val előidézett, 50 felfelé irányuló vesefertőzés ellen. Nőstény egerekben (ddY törzs, 6-hetesek, testsúlyuk 22—26 g) felfelé irányul vesefertőzést idéz- 55 tünk elő úgy, hogy Escherichia coli NIHJ JC 2-t 0,4 ml Tryptosoya levesben (Nissan) szuszpendálva becsepegtettünk a pentobarbitál-nátriummal altatott egerek húgyvezetékébe, az egereket 6 órán át 25 mm átmérőjű műanyagcsőben tartottuk, és a 60 húgyvezeték nyílását lekötöttük. Az I képletü vegyületet, a nalidixsavat, illetve a pipemidinsavat 0,5%-os karboximetilcellulóz-oldatban szuszpendáltuk; Valamennyi kísérleti vegyületet orálisan adtuk be, 3 órával a beoltás után. Az egereket a ráfertő- 65 98,0 (79,7-120,5) 185 400 (317-504) 1120 800 (630-1,016) 1430 zés után 48 órával leöltük. Az egerek veséit aszeptikusán eltávolítottuk, és kettévágtuk, a két felét kipréseltük és dezoxikolát-táptalajt (Nissan) tartalmazó agarlemezre kentük. A vegyületek terápiás hatását úgy állípítottuk meg, hogy 20 órán át 37 °-on végzett inkubálás után értékeltük az agar felületén a növekedés elmaradását. A vegyületek hatásösszehasonlítását az 50%-ban hatásos dózis (EDS0) alapján végeztük, amit mintavizsgálattal és 95%-os megbízhatósági határral számítottunk ki, utóbbit Litchfield és Wilcoxon módszerével. Amint az a 3. táblázatból látható, a 2. példa szerint előállított vegyület hatásos volt egérben Escherichia coli-val előidézett felfelé irányuló vesefertőzés ellen, és azt is megállapítottuk, hogy az I képletü vegyület hatásosabb volt, mint a nalidixsav és a pipemidinsav. Az I képletü vegyülét LDi0 értéke több mint 4 g/kg egérben, és igen jól a biztonsági zónában van (LDio/ED90 =65,6 felett). 4
