176260. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emkefelin-analóg polipeptidek előállítására
IS 176260 16 75 °C >s fürdőn visszafolyatás közben forraljuk. A nátriumhidrid fölöslegét hűtés közben etilacetáttal elbontjuk, majd a szuszpenzióhoz vizet adunk. Csaknem teljesen átlátszó oldatot adunk. Az oldatot vákuumban bepároljuk, és a kapott vizes maradékot 150 ml vízzel hígítjuk. Az oldatot a metil észter-szennyezések eltávolítása érdekében éterrel kétszer mossuk, majd citromsavval 3-as pH-értékre savanyítjuk. A savas elegyet eetilacetáttal (400 ml, majd kétszer 200 ml) extraháljuk. Az extraktumokat egyesítjük, egymás után 100 ml vízzel, 100 ml 10 vegyes %-os vizes nátrium-tioszulfát-oldattal, majd vízzel semlegesre mossuk, végül vízmentes magnéziumszulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A kapott olajos maradékot 200 ml 30 °C-os petroléterben (forráspont-tartomány: 60—80 °C) szuszpendáljuk, és a szuszpenzióhoz etilacetátot adunk. A kapott átlátszó oldatot 4 °C-ra hűtjük. Az oldatból 96-99 °C-on olvadó, szilárd termék formájában Z— MeTyr—(Bu*)—OH válik ki. •Ez az eljárás McDermott és Benoiton metilezési módszerén alapul [Can. J. Chem. 51, 1915 (1973)]. RÍ. módszer: 5,33 g (17mmól) Phe—Azleu— NH2 ' HC1 és 2,45 ml (17 mmól) trietilamin 50 ml kloroformmal készített oldatához 3,87 g (17 mmól) Z—NHNH—CO— Cl-t adunk. Az elegyet 16 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd 400 ml etilacetátot adunk hozzá. Az oldatot egymás után vízzel és 20 vegyes %-os vizes citromsav-oldattal mossuk, vízmentes nátriumszulfát fölött szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékot szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként 2 térfogat % metanolt tartalmazó kloroformot, majd P. és Q. rendszert alkalmazunk. Szilárd anyagként Z—Azgly— -Phe—Azleu-NH2-t kapunk, op.: 116-120 °C (bomlás). SÍ. módszer: 17,5 g (30 mmól Z-Tyr(Bzl)-OCp és 4,38 g (30 mmól) Boc-NMe-NH2 50 ml dimetilformamiddal készített oldatát 18 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. Az elegyet 500 ml etilacetáttal hígítjuk, majd egymás után vízzel, 20 vegyes %-os vizes citromsav-oldattal, végül ismét vízzel mossuk. Az extraktumot szárítjuk, vákuümban bepároljuk, és a kapott szilárd maradékot 100 mmól sósav etilacetátos oldatával kezeljük. Az elegyet 2 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd az oldószert vákuumban lepároljuk. Termékként Z—Tyr(Bzl)—NHNHMe • HCl-t kapunk, op.: 223-224 °C, Rf: 0,82 (D. rendszer), 0,64 (F. rendszer), 0,63 (Q. rendszer). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 9,4 g (20 mmól), a fentiek szerint kapott hidrokloridot 200 ml kloroformban oldunk, és az oldathoz 2,8 ml (20 mmól) trietilamint, majd 2,3 g 55 (20 mmól) metil-izocianáto-acetátot adunk. Az elegyet 18 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd az oldószert vákuumban lepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk. Az oldatot egymás után vízzel, 20 vegyes %-os vizes citromsav-oldattal, telített 60 vizes nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal, végül ismét vízzel mossuk, szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A terméket metanol és éter elegyéből kristályosítjuk. 107-108 °C-on olvadó Z-Tyr(Bzl)-Azala— -Gly-OMe-t kapunk. (5 A korábbiakban közölt módszerekkel előállított kiindulási anyagok szerkezetét és azonosítási állandóit az 1—16. táblázatban adjuk meg. A táblázatokban az egyes vegyületekhez vezető módszereket is feltüntetjük, és a „Megjegyzés” rovatban a reakciókörülményekre, illetve a kapott anyagra jellemző további információkat közlünk. Megjegyzések az 1—16. táblázathoz: 1. Kicsapással tisztítjuk. 2. Op.: 160-161 °C (bomlás). 3. Petroléterből (forráspont-tartomány: 60— -80 °C) átkristályosított anyag. 4. Izopropanol és éter elegyéből átkristályosított anyag, op.: 181-183 °C. 5. Izopropanolból átkristályosított anyag, op.: 193-194°C. 6. A vegyületet szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként kloroformot és 2 térfogat% metanolt tartalmazó kloroformot használunk. 7. A vegyületet szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként kloroformot használunk. 8. A terméket szilikagél oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként kloroformot és P rendszert használónk. 9. Etilacetátból átkristályosított anyag, op.: 128-130°C. 10. A vegyületet szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként G. rendszert használunk. 12. Etilacetát és petroléter (forráspont-tartomány: 60-80 °C) 1:1 elegyéből átkristályosított anyag, op.: 96—99 °C. 13. Etilacetát és petroléter (forráspont-tartomány: 60-80 °C) 1:1 elegyéből átkristályosított anyag, op.: 202—203 °C. 14. Etilacetátból átkristályosított anyag, op.: 122-123 °C. 15. A vegyületet szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként P. és Q. rendszert használunk. 16. Etilacetátból átkristályosított anyag, op.: 177-179 °C. 17. Etilacetát és petroléter (forráspont-tartomány: 60-80 °C) 50:50 térfogatarányú elegyéből átkristályosított anyag, op.: 122-123 °C. 18. Etilacetát és petroléter (forráspont-tartomány: 60—80 °C) 50:50 térfogatarányú elegyéből átkristályosított anyag, op.: 108,5-110 °C. 20. Metanolból átkristályosított anyag, op.: 219-220 °C. 21. Etilacetát és petroléter (forráspont-tartomány: 60-80 °C) 50:50 térfogatarányú elegyéből átkristályosított anyag, op.: 121-122 °C. 22. Toluol és benzol 50 :50 térfogatarányú elegyéből átkristályosított anyag. 23. Etilacetát és petroléter 50 :50 térfogatarányú elegyéből átkristályosított anyag, op.: 133-135 °C. 24. A vegyületet szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként P. rendszert használunk. 25. A vegyületet szilikagél-oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként 3 térfogat % metanolt tartalmazó kloroformot használunk. 26. A vegyületet szüikagélen kromatografáljuk, eluálószerként Q. rendszert használunk.
